中药提取物及微生物发酵提取物对人参病害抑菌效果的研究

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在人参的种植过程中,人参病原菌很容易感染到人参使人参患病从而影响到人参的质量和产量。每年因此所造成的经济损失巨大,这使得如何保证人参的正常生长过程中尽量减少病害的侵袭,成为多年来人参种植人员和科研人员研究的重点。施用传统的化学农药虽然能够起到很好的预防和抑制作用,但是,随着对化学农药认识的加深,以及其在长期使用的过程中暴露出的危害性,化学农药必然会被对身体健康和环境影响小的生物农药所取代。本文针对此现状,从植物源和微生物源抑菌剂两方面入手,筛选出对人参病原菌有抑制作用的中药和菌类,进行初步研究。1.从吉林省人参种植南区采回的土样中,共分离得到113株菌,真菌23株,细菌66株,放线菌24株,其中细菌PFD2对人参黑斑和灰霉病原菌有良好的抑制效果,故将此细菌作为重点研究对象,进行深入的研究。从形态学鉴定只能鉴定出菌株PFD2为芽孢杆菌属,无法精确的确定出其分类地位。采用16SrDNA序列分析的方法进行鉴定,显示出其与多粘芽孢杆菌有极高的相似性,并最终确定该菌株为多粘芽孢杆菌,命名为JL2011。对分离获得的菌株PFD2进行液体发酵条件优化及发酵培养基的筛选。首先,利用单因素试验确定出最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为蛋白胨。通过正交试验对各种营养物质的添加量进行对比试验,确定出菌株PFD2最佳发酵条件及培养基组成:葡萄糖2%,蛋白胨0.3%,0.5%NaCl,最适培养温度为28℃,培养天数为2天,pH值为6,装液量为100mL/250mL,接种量为100mL接种4mL种子液,转速140r/min。2.选用甘草、蛇床子、车前子、藿香、葛根、肉桂6种中药的乙醇和水提取液,采用菌丝生长法对人参灰霉病菌、人参锈腐病菌、人参黑霉病菌和人参菌核病菌,进行了抑菌活性的筛选,筛选结果为甘草、肉桂80%乙醇提取物的抑菌效果明显,其中肉桂提取液抑菌效果最强,对人参锈腐病菌,人参黑斑病菌抑菌效果达到100%,对灰霉病原菌和菌核病原菌抑制效果稍显逊色。3.菌株PFD2发酵液与中药提取物协同作用于人参,测定其抑制效果。将肉桂和甘草以不同的添加量与菌株PFD2共发酵,测定发酵上清液的抑菌效果,经研究表明,共发酵后,菌株PFD2生长受影响,且发酵液抑菌效果不明显。将中药乙醇提取物与菌株PFD2发酵上清液复配后进行抑菌效果的测定,结果显示V发酵液:V肉桂=5:3时有最佳抑菌效果。
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