论文部分内容阅读
目的:探讨Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤发病机制中的可能作用。莫罗尼鼠白血病病毒前病毒整合基因(Proviral integration of moloney murineleukemia virus,Pim)是一种原癌基因,它编码的蛋白是丝/苏氨酸激酶中的一种,主要涉及细胞周期的调节、蛋白质的转录与翻译、促凋亡、细胞代谢的调节及介导耐药蛋白的产生,与肿瘤的发生密切相关。Pim家族由Pim-1、Pim-2、Pim-3成员组成,可根据选择不同的转录位点编码不同的蛋白,均属于钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶家族。但它们在不同组织中得表达情况却不一样:Pim-1高表达于造血细胞,Pim-2高表达于脑和淋巴细胞,而Pim-3则高表达于肾脏、乳房和脑细。已有文献显示[29]骨髓瘤细胞系中不同程度的表达Pim-1、Pim-2及Pim-3。C-myc是一种多功能的原癌基因,位于人类染色体8q24上,其不仅具备转录因子的功能促进细胞增殖,还可以抑制细胞的分化、促进细胞周期的进展并抑制细胞的凋亡。C-myc基因能够通过扩增和染色体易位重排而激活,在肿瘤的发生发展中具有重要作用,已发现在多种人类肿瘤包括乳腺癌、急性白血病、骨肉瘤中的表达上调,而在小鼠浆细胞瘤和人类多发性骨髓瘤患者中也均发现C-myc的重排和过度表达。本课题采用RT-PCR和Western Blot两种方法检测Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤患者及正常对照组中的表达情况并探讨Pim-1及C-myc在多发性骨髓瘤发病机制中的可能作用,为多发性骨髓瘤的诊疗提供新的思路及方法并寻找相关的理论依据。方法:1.选取2012.07-2013.09来本院就诊的22例初诊MM患者骨髓液作为初治组,选取2013.01-2013.09初诊的10例排除恶性血液病患者(排除肿瘤、感染、免疫系统疾病等影响试验结果疾病)骨髓液作为正常对照组。2.抽取骨髓液2ml,EDTA-2K抗凝,利用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,制成单个核细胞悬液,保存于-80℃冰箱备用。3.提取单个核细胞中的总RNA,用分光光度计A260/A280的比值来判断RNA样品纯度,确保比值在1.8-2.0之间,并逆转录成cDNA。4.选择GAPDH为内参照基因,Pim-1及C-myc核酸引物由DNASTAR软件设计,由上海生工生物公司合成,用于Pim-1和C-myc mRNA的PCR扩增。5.利用1.5%琼脂糖凝胶电泳和Bio-Image Analysis System分析Pim-1和C-myc mRNA的表达和差异。6.采用Western blot检测Pim-1和C-myc蛋白表达情况。结果:初诊MM患者的Pim-1mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。初诊MM患者的C-myc mRNA及蛋白水平在初诊骨髓瘤患者表达强度显著高于对照组。结论:Pim-1及C-myc在MM中高表达,与对照组相比差异有显著性,与多项临床指标及分期有关,可能通过多种途径促进骨髓瘤细胞的生长而抑制其凋亡,且二者在多发性骨髓瘤的发生发展中可能具有协同作用。