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目的探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）外泌体（exsomes）对POF（Premature ovarian failure,POF）大鼠卵巢的功能调节作用及影响的机制,为外泌体治疗卵巢早衰提供实验基础。方法1、大鼠BMSCs的体外分离、培养、鉴定及外泌体提取鉴定:取SD大鼠,脱臼法处死后,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,通过贴壁筛选法筛选出纯度较高的骨髓间充质干细胞,BMSC体外培养至第3代,0.25%胰蛋白酶消化成细胞悬液,流式细胞仪上机分析BMSCs表面因子CD105,CD34,CD45及CD90。取3-5代生长良好细胞,饥饿培养24小时后收集培养上清,离心过滤得到外泌体浓缩液。采用exoEasy Maxi Kit试剂盒提取外泌体。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测BMSCs外泌体表面特异性标志蛋白CD81及CD9的表达。2、POF大鼠分组造模:SD大鼠饲养1周后随机分为三组,对照组,模型组和治疗组。对照组腹腔注射生理盐水,模型组和外泌体治疗组腹腔注射顺铂2.5 mg/kg,连续1周制备大鼠早衰模型。病理切片观察建模效果。治疗组大鼠在造模一周后,经尾静脉注射BMSCs外泌体悬浮液100?g/kg,每周三次,连续两周,收集血液和卵巢等组织,检测各种卵巢功能指标,通过ELISA检测血清中雌激素水平;HE染色后观察大鼠卵巢结构及卵泡发育情况。观察外泌体对卵巢的影响。3、体外BMSCs外泌体对顺铂损伤颗粒细胞的影响:分离培养大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells,GCs）,通过免疫细胞化学检测促卵泡激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）在颗粒细胞中表达来鉴定GCs。GCs加入7.5mg/L,用含有BMSCs外泌体的培养基培养GCs,48小时后收集GCs,Annexin-V/PI法检测GCs凋亡率,并用WB检测GCs内Cas-3,9。结果1、BMSCs的细胞形态和流式表面鉴定。大鼠骨髓腔冲出的间充质干细胞,接种于培养皿中,BMSCs贴壁生长,呈长梭形排列,铺满皿底,消化传代。培养的P3 BMSCs的CD105、CD90表达量分别为（96.7±1.35）%、（99.25±1.03）%、CD45、CD34阴性表达,符合间充质干细胞表型。透射电镜下可以看到直径30-100nm的圆形或椭圆形的膜性小囊泡,囊泡内有低密度电子存在,其周围有类脂膜性结构的存在,Western Blot检测显示间充质干细胞外泌体表面表达特异性标志蛋白CD81和CD9。2、SD大鼠分组造模及卵巢功能测定。大鼠注射顺铂后第2天开始均出现不同程度的体重下降,身体消瘦,活动减少,精神萎靡,蜷缩,体毛晦暗无光泽,进食及二便减少。各组大鼠用药前动情周期规律,周期为3-5 d。注射顺铂后大鼠动情周期出现紊乱。POF组大鼠卵巢HE染色卵泡数量明显较少,排列紊乱,形态不一,黄体数目明显减少,纤维组织增生紊乱。模型组与正常组比较大鼠血的FSH值有统计学意义（P<0.05）,卵泡对FSH敏感度降低是卵巢功能衰退的早期表现,说明造模成功。治疗组、模型组和对照组之间进行方差分析,FSH、E2值均有显著差异（P<0.05）。且治疗组的FSH、E2均接近对照组水平。治疗组的各级卵泡数量,黄体数量与模型组比较均有增加,接近对照组水平,三组之间进行方差分析,组间差异有统计学意义（P<0.05）3、外泌体对颗粒细胞的影响。原代GCs在接种48小时后贴壁生长,呈圆形,细胞稀疏,细胞呈集落样生长。第1代GCs表达FSHR,而多边形及梭形杂细胞表达阴性。当顺铂浓度为7.5mg/L时,颗粒细胞生长明显受抑制。BMSCs外泌体与GCs共培养后,GCs存活率升高,凋亡率降低。含外泌体与顺铂的培养基中GCs的Cas-3,9蛋白含量明显下降,低于顺铂诱导的颗粒细胞。结论骨髓间充质干细胞分泌的外泌体可通过抑制颗粒细胞的凋亡发挥改善SD卵巢早衰大鼠卵巢功能的作用。