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研究背景c-Myc及E2F1相关信号途径是决定细胞命运的核心机制之一，研究已证实hTERT是二者共同的下游靶基因，不同的是：c-Myc诱导hTERT表达，而E2F1则抑制hTERT的表达。由于E2F1也受c-Myc正性调节，因此，我们推测：在正常细胞中，E2F1可能对c-Myc-hTERT信号途径存在着负反馈调控，从而在一定程度上抑制了肿瘤发生的危险性。研究方法本项目拟针对上述假设，以人胚胎成纤维细胞为模型，采用基因转染、荧光素酶报告基因实验、CHIP、CHIP-re-CHIP等技术证实E2F1对c-Myc诱导hTERT表达的负反馈调节作用。研究结果1)c-Myc活化对人胚胎成纤维细胞hTERT和E2F1表达及下游信号通路的影响以Ad-c-Myc重组腺病毒感染人胚胎成纤维细胞，qRT-PCR及Western blot检测c-Myc活化对E2F1和hTERT mRNA及蛋白表达水平的影响。结果显示，E2F1和hTERT的表达在c-Myc激活的情况下均会出现增加，二者区别在于，前者的表达水平是在c-Myc高度激活时才出现明显增加，而后者的表达水平则可在c-Myc低度激活时就开始增加，而且c-Myc激活的程度越高，hTERT的表达水平增加越多，其表达水平的增加与c-Myc激活的程度是一致的。进一步，我们探讨了c-Myc活化对E2F1和hTERT下游信号通路的影响，结果显示，在c-Myc中低度时，端粒酶活性逐渐升高，而细胞凋亡的比率并没有明显改变；在c-Myc被高度激活的情况下，E2F1的蛋白表达水平出现明显升高，这也就能够增加细胞凋亡的比率。随后对E2F1加以抑制，我们发现：在c-Myc中低度激活时抑制E2F1表达，可致hTERT活化水平上升；而在c-Myc受到高度激活的同时对E2F1的表达加以抑制，则能够避免细胞凋亡，且细胞端粒酶的活性会出现有进一步的升高。以上这些结果显示：E2F1对c-Myc诱导hTERT表达是存在着负反馈调控作用的。2)E2F1通过与hTERT启动子区域结合对c-Myc诱导hTERT表达进行负反馈调控我们首先应用双荧光素酶报告基因实验证实，在人胚胎成纤维细胞中E2F1能够抑制hTERT基因表达，这个过程是可以通过E2F1与hTERT启动子的结合而得以实现的；随后应用CHIP实验(anti-E2F1)进一步验证E2F1可与hTERT启动子区域直接结合；CHIP-re-CHIP实验(anti-E2F1和anti-c-Myc)则显示c-Myc活化时同时与hTERT启动子区域结合的c-Myc及E2F1蛋白水平增加，提示：c-Myc活化时，虽与hTERT启动子区域结合的c-Myc蛋白水平增加，但由于抑制hTERT启动子活性的E2F1蛋白的结合水平也有增加，因而其转录并未开启，不会导致肿瘤发生。结论在正常细胞中，E2F1对c-Myc诱导hTERT表达起到关键的负反馈调控作用，其对限制c-Myc-hTERT信号通路传导的致瘤作用具有重要意义。