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本论文首先综述电致化学发光的基本原理、常见的反应类型及常用的发光试剂和纳米材料参与电化学发光构建生物传感的现状。石墨烯量子点作为一种新型电化学发光试剂,在构建生物传感方面也表现出良好的特性。基于ECL-RET技术已应用于DNA、细胞传感及免疫分析等领域。基于此,本论文以电化学发光方法构建生物传感为目标,利用纳米材料信号增强作用,构建新型电化学发光生物传感器分别用于DNA甲基转移酶和蛋白激酶的检测,进一步开展了DNA甲基转移酶和蛋白激酶对应抑制剂的筛选等相关研究,主要包括以下两个方面的工作:1.成功合成了具有电化学发光特性的GO/AgNPs/luminol复合物用于构建新型Dam MTase活性检测的ECL传感器。首先,在氧化石墨烯表面以luminol为还原剂还原硝酸银(AgNO3)为AgNPs,成功制备了具有电化学发光特性的GO/AgNPs/luminol复合物,接着加入炔丙胺后通过Ag-N键形成炔基功能化的GO/AgNPs/luminol复合物,在Cu(I)催化下炔基化合物与叠氮化合物发生点击反应将GO/AgNPs/luminol复合物组装在叠氮修饰dsDNA的电极表面,在共反应剂H2O2存在时产生luminol的强电致化学发光(ECL);将该电极浸入DNA甲基转移酶(Dam)溶液中,含5′-GATC-3′序列的dsDNA发生甲基化,而后被甲基化限制性内切酶Dpn I剪切,使得部分GO/AgNPs/luminol复合物从电极表面脱落下来,导致luminol的ECL信号下降。GO/AgNPs/luminol的ECL减少与Dam浓度呈正相关。因此,可通过ECL信号的变化检测Dam的活性,对Dam检测的线性范围为0.1-20 U/mL,检测限为0.03 U/mL。本方法还可用于Dam抑制剂的筛选,从5-氟尿嘧啶对应的ECL响应曲线计算得到IC50值为18.2μM。2.以石墨烯量子点(GQDs)和鲁米诺(luminol)分别为阴极和阳极ECL发光试剂,建立了双电位比率ECL传感平台,用于检测蛋白激酶活性及抑制剂筛选。首先,将羧基化的GQDs通过共价键合作用组装在壳聚糖修饰电极表面,通过酰胺作用使多肽连接在电极表面,在巯基三磷酸腺苷(ATP-s)和蛋白激酶(PKA)的作用下,多肽发生磷酸化,进而通过Au-S键作用将Au NPs捕获于巯基磷酸化多肽修饰电极表面。以H2O2为共反应剂时,GQDs和靠近电极表面的Au NPs发生能量共振转移使GQDs的阴极ECL强度下降,同时,该Au NPs促进了luminol在电极表面的电子传递而使得luminol的阳极ECL强度上升。在同一体系中,同时实现了GQDs的阴极ECL减小和luminol的阳极ECL增强。随着激酶浓度的增加,更多的Au NPs被捕获于电极上,使得对luminol的ECL反应有更高的电催化活性,同时与GQDs有更强的ECL能量共振转移。因此,luminol的ECL增加程度与GQDs的ECL减小程度的比值与PKA活性呈正相关,对PKA检测的线性范围为0.01-10 U/mL,检测限为0.005 U/mL。本方法还可用于对PKA抑制剂的有效筛选,根据不同浓度的鞣花酸对应的ECL响应,计算出鞣花酸IC50值为0.15μM。此外,利用传感器还实现了人血清和MCF-7乳腺癌细胞溶解产物等复杂生物环境中PKA的检测。