【摘 要】
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肝纤维化是由于肝脏胶原等细胞外基质(Extra Cellular Matrix ECM)合成与降解失衡,导致在肝内过量沉积。研究表明活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell HSC)是肝纤维化过
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肝纤维化是由于肝脏胶原等细胞外基质(Extra Cellular Matrix ECM)合成与降解失衡,导致在肝内过量沉积。研究表明活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell HSC)是肝纤维化过程中ECM的主要合成细胞;TGFβ1是已知最强的促纤维生成的细胞因子,能促进HSC活化、增加ECM合成和沉积;Smads蛋白是TGFβ信号转导的中介分子。因此,TGFβ/Smad轴成为抗肝纤维化治疗的一个重要靶点。sTGFβRⅡ和hIFN-γ都有抗肝纤维化作用,前者竞争性抑制TGFβRⅡ和TGFβ1的结合,从而阻断TGFβ1的生物学作用;后者通过Jak/Stat途经抑制Smad3,从而间接抑制TGFβ生物学活性、抑制HSC活化。sTGFβR Ⅱ和IFN-γ能在不同位点阻断TGFβ1的生物学活性、抑制HSC活化,联合应用两者将可能产生抗肝纤维化的协同效应,并因减少了各自用量而降低副作用。 实验目的 构建可溶性人转化生长因子-β Ⅱ型受体(soluble transfouminggrowth factou beta receptou sTGFβRⅡ)与人γ干扰素(hIFN-γ)融合基因的真核表达质粒PCDNA3.1(+)—sTGFβRⅡ/hIFN-γ,并将PCDNA3.1(+)—sTGFβRⅡ/hIFN-γ在DG44细胞进行表达;筛选高效表达细胞株并建立大规模培养体系;分析此融合蛋白的生物学活性,体外抗肝纤维化活性和抗纤维化分子机制。
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