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本文以枳实中黄酮类化合物提取、分离纯化为目的,运用乙醇回流法为提取手段,实现黄酮类化合物的最大化利用。经过提取、分离、纯化得到七种黄酮化合物单体,借助RP—HPLC、ESI—MS、1D—,2D—NMR等现代仪器对黄酮类化合物进行了分析和结构鉴定。1.枳实粗提物中黄酮苷类化合物检测方法的确定运用RP—HPLC法,确立在岛津ODS柱(RP—18,5μm,250min×4.6)上,以①流动相:水:乙腈(v/v)=78%等梯度25min后,10min内水的体积转为10%并保留此梯度20min;②流速:0.8ml/min;③检测波长:280nm完成分析。该方法大大提高了黄酮苷类化合物检测的专属性和有效性,分析结果较为准确可靠。在该条件下,以LC/MS为检测方法,初步鉴定出粗提物中含有四种黄酮苷类化合物,并以此四种黄酮苷类化合物的提取率作为优化枳实中黄酮类化合物提取工艺的标准。2.枳实中黄酮苷类化合物提取工艺的确定研究了乙醇提取液浓度、提取时间、料液比对黄酮苷类化合物提取率的影响并确定提取次数,根据四种黄酮苷峰面积之和所占的百分比判断提取率的大小,确定适合大量提取的工艺。综合考虑提取和后期处理成本,以采用60%乙醇水溶液,回流提取1.5h,按照1:10的料液比,提取2—3次为宜。3.枳实中黄酮类化合物分离、纯化与鉴定分离纯化并鉴定了四种黄酮苷类化合物、三种多甲氧基黄酮化合物:芸香柚皮苷(narinrutin)、柚皮苷(naringin)、橙皮苷(hesperidin)、新橙皮苷(neohesperidin);桔皮晶(tangeretin)、蜜桔黄素(nobiletin)、4′,5,7,8—四甲氧基黄酮(4′,5,7,8—Tetramethoxyflavone)。其中桔皮晶,蜜桔黄素,4′,5,7,8—四甲氧基黄酮在此前与枳实相关的其他文献中未见报道,很可能是首次从该中药中分离得到的。4.枳实中多甲氧基黄酮的生物活性研究对桔皮晶、蜜桔黄素,4′,5,7,8—四甲氧基黄酮进行了抗肿瘤生物活性体外筛选试验,结果表明三种多甲氧基黄酮对人乳腺癌Bcap37细胞及人肝癌SMMC7721细胞具有一定的体外增殖抑制作用,其中桔皮晶对Bcap37细胞的抑制作用以及蜜桔黄素对SMMC7721细胞的抑制作用相对较强。