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目的:肝癌细胞具有辐照耐受性,研究RMP与p53在辐照诱导的肝癌细胞中的关系,有助于了解RMP对辐照诱导的肝癌细胞DNA损伤修复和细胞凋亡的作用机制,从而为解决肝癌辐照耐受性提供了可能的治疗方法。方法:1、彗星电泳检测正常肝细胞7701辐照后时间点的DNA损伤程度;2、Western Blot检测正常肝细胞7701和肝癌细胞Hep G2辐照后时间点的RMP、p53和p-p53蛋白表达水平;3、荧光定量PCR和Western Blot检测肝癌细胞Hep G2、Huh7和Hep3B的RMP、p53的m RNA及蛋白表达水平;4、荧光定量PCR和Western Blot检测肝癌细胞Hep G2、Huh7和Hep3B瞬时转染RMP过表达质粒和RMP干扰质粒后RMP和p53的m RNA及蛋白表达水平;5、彗星电泳检测肝癌细胞Hep G2、Hep3B及转染空载体质粒、RMP质粒、p53质粒以及共转染RMP和p53质粒辐照后1小时的DNA损伤程度;6、流式细胞仪检测肝癌细胞Hep G2、Hep3B及转染空载体质粒、RMP质粒、p53质粒以及共转染RMP和p53质粒辐照后1小时的细胞凋亡变化;7、Western Blot检测肝癌细胞Hep G2、Hep3B及转染空载体质粒、RMP质粒、p53质粒以及共转染RMP和p53质粒的RMP、p53、Bcl-xl、Bad、p-Bad、γ-H2AX蛋白表达的水平;结果:1、彗星电泳检测正常肝细胞7701辐照后时间点的DNA损伤表明辐照1h后细胞损伤程度明显增加。2、Western Blot检测正常肝细胞7701辐照后RMP蛋白表达水平无明显变化,肝癌细胞Hep G2辐照后RMP蛋白表达水平在1小时后达到高峰。正常肝细胞7701和肝癌细胞Hep G2中p53蛋白表达水平明显下降,p-p53表达水平增加。3、荧光定量PCR和Western Blot结果表明,Huh7(p53突变型)中RMP的m RNA和蛋白较Hep G2(p53野生型)明显降低。Hep3B(p53缺失型)中RMP的m RNA和蛋白较Hep G2明显增加。4、荧光定量PCR和Western Blot结果表明,Hep G2和Huh7中RMP过表达组中p53的m RNA和蛋白水平较空载体转染组明显降低,RMP干扰组结果相反。Hep3B中RMP过表达组和干扰组中p53均无表达。5、彗星电泳结果表明Hep G2、Hep3B细胞中RMP过表达组的OTM值较空载体组明显降低,RMP干扰组则相反。Hep G2细胞中p53过表达组的OTM值较空载体组明显增加,干扰组则相反。Hep3B(p53缺失型)中p53过表达组的OTM值较空载体组增加。Hep G2和Hep3B细胞中共转染RMP过表达和p53过表达组的OTM值较p53过表达组明显降低,较RMP过表达组明显增加。Hep G2和Hep3B细胞中共转染RMP干扰和p53过表达组的OTM值较RMP干扰组和p53过表达组明显增加。6、流式细胞仪结果表明Hep G2、Hep3B细胞中RMP过表达组的细胞凋亡较空载体组明显减少,RMP干扰组则相反。Hep G2细胞中p53过表达组的细胞凋亡较空载体组明显增加,干扰组则相反。Hep3B(p53缺失型)中p53过表达组的细胞凋亡较空载体组增加。Hep G2和Hep3B细胞中共转染RMP过表达和p53过表达组的细胞凋亡较p53过表达组明显降低,较RMP过表达组明显增加。Hep G2和Hep3B细胞中共转染RMP干扰和p53过表达组的细胞凋亡较RMP干扰组和p53过表达组明显增加。7、Western Blot结果表明肝癌细胞Hep G2和Hep3B中,RMP过表达组和p53干扰组中γ-H2AX较空载体组减少。RMP过表达组的Bcl-xl较空载体组增加,Bad磷酸化增加,干扰组相反。在RMP和p53共转染组中结果类似。结论:1、正常肝细胞和肝癌细胞RMP蛋白表达不同,辐照后肝癌细胞RMP的蛋白表达水平增加;2、未辐照时,肝癌细胞RMP和p53相互抑制;3、p53促进辐照诱导的肝癌细胞的凋亡和DNA损伤不依赖RMP;4、p53可以减弱RMP对辐照诱导的肝癌细胞凋亡和DNA损伤的抑制;5、RMP抑制辐照诱导的肝癌细胞的凋亡和DNA损伤不依赖p53。