论文部分内容阅读
本研究利用屠宰黄牛卵巢，对卵巢表面2～6n皿卵泡卵母细胞的体外成熟(IVM)一体外受精(IVF)—受精卵的体外发育(IVD)进行了系列研究，并探讨了其影响因素，结果表明： (1)采用TCM-199与添加10％发情牛血清(ECS)培养牛卵泡卵母细胞，获得了较高的卵母细胞体外成熟率(81.39％)、卵裂率(56.05％)和桑囊率(30.94％)，进一步证明在体外成熟培养液中单独添加10％的ECS是可行的，适宜在生产中推广应用。 (2)在卵母细胞体外成熟培养液和早期胚胎培养液中分别添加0.5μg／ml的谷胱甘肽(GSH)，能够提高受精卵的桑椹胚及囊胚的发育能力。这表明GSH对牛胚胎的发育有一定的保护和促进作用。 (3)在卵母细胞成熟培养液(TCM-199+10％ECS)中添加1μg／ml表皮生长因子(EGF)，可以明显地提高卵母细胞的体外成熟率、卵裂率，表明体外成熟培养液中添加EGF对卵母体外成熟和卵裂有良好的促进作用。 (4)对冻精的处理方法中的直接离心洗涤法、上游法和Percoll法进行了比较实验，结果显示，Percoll法与洗涤法之间卵裂率差异显著(P＜0.05)；而上游法与洗涤法的桑囊率差异显著(P＜0.05)，但Percoll法与上游法的卵裂率和桑囊率差异均不显著(P＞0.05)。这表明在胚胎体外生产中，Percoll法与上游法都可采用。 (5)比较了在早期胚胎培养液中添加0.1mS／ml谷氨酰胺(Gln)与联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子(EGF)对牛胚胎体外发育的影响，结果表明联合添加Gln与EGF可以提高胚胎4-8细胞发育率，而且可以显著促进桑囊胚的发育。 (6)建立了相对比较实用且有效的牛卵泡卵母细胞IVM—IVF—IVC程序：卵母细胞在TCM-199+10％ECS+1μg／mlEGF的成熟培养液中培养23～24h；冻精用BO液配制的30％及45％Percoll液进行洗涤(加有3mg／ml BSA和10μg／ml肝素钠)，精卵在受精液(另加有5mM咖啡因)中共同孵育6-8小时；将受精卵从受精液中移入TCM-199+10％ECS+1μg／mlEGF+0.1mg／mlGln中与颗粒细胞单层(GCM)共同培养，直到发育至桑椹胚或囊胚。