新世纪,为应对全球SARS、H5N1、MERS、Ebola等传染病持续爆发和人为恶意使用高危病原体的威胁,各国纷纷加强对高致病性病原微生物的研究,兴建了一系列高等级生物安全实验室。随着世界各地实验室数量的增多,随之而来的生物安全问题引起了人们的普遍关注,再加上近年来,陆续出现的几次较严重实验室生物安全事件,造成实验室人员暴露感染风险,污染周围环境,导致疾病的爆发流行,产生及其严重的经济损失,造成社会极大的恐慌,给生物安全从业者敲响了警钟。我国生物安全实验室建设起步较晚,实验室研究任务多,负荷重,在安全操作与安全运行管理上还比较薄弱,随着实验室的持续运行,实验室调整维护时间减少,实验室生物安全风险更大。因此,通过分析实验室生物安全风险因素,建立科学有效的风险控制综合措施方案,是实现实验室安全运行的重要一环。按生物因子暴露原因,将引发实验室生物安全事故的风险因素分为以下几类:(1)实验室内人员暴露和感染;(2)实验室外环境泄漏;(3)生物因子的恶意使用或意外丢失。其中,外环境泄漏经常在实验室未察觉的情况下发生,在生物因子扩散或造成一定的影响后,经过调查或偶然发现,最终造成严重的损失。目前,国内外高级别生物安全实验室的相关研究中,尚未开展关于高等级生物安全实验室外环境泄漏的系统风险分析与风险控制,未详细阐述实验室外环境泄漏的具体风险因素,未形成外环境泄漏综合控制措,再加上我国高等级生物安全实验室风险管理还比较薄弱,因此本研究对维持我国BSL-3实验室安全运行具有重要意义。在前期研究中,课题组在实验室运行管理、实验室微生物采样、消毒评价方面积累了大量的经验,形成了一系列相关方法的操作标准;在“十一五”期间开展了BSL-3实验室实验活动风险分析、风险评估以及风险控制的相关研究,明确了实验室内部活动风险及其控制方法,指导BSL-3实验室更好的实现实验活动的安全。现在,本研究主要通过对BSL-3实验室外环境泄漏进行风险分析,明确实验室外环境泄漏的风险因素,提出泄漏相关检测、检测方法,形成实验室外环境泄漏的综合控制措施方案,辅助BSL-3实验室实现外环境泄漏的安全管理。本研究主要以实验室外环境泄漏的风险分析和风险控制为目的,以实验室发生泄漏事故为“情景”,参考实验室运行管理经验教训,在国内外首次进行实验室外环境泄漏的风险分析,具体分析实验室“四流”途径中可能的泄漏关键部位及其风险因子,确定病原微生物泄漏外环境的途径方式与具体风险因素,在经典微生物检测技术的基础上选择构建外环境泄漏的检测、监测方法及技术标准,并依据风险分析与检测方法,提出合理的风险控制措施方案,为我国BSL-3实验室外环境泄漏管理提供参考。本研究的具体方法及其结果包括:1.分析外环境泄漏的风险途径及其具体风险因素:首先在PubMed数据库、美国CDC官网、中国知网检索外环境泄漏事故文献,获得45例外环境泄漏事故及其泄漏途径、泄漏原因、风险因素,总结出外环境泄漏的途径。2.按照时间空间顺序具体解析7个泄漏途径的风险因素,分析泄漏的形式与原因,形成BSL-3实验室外环境泄漏的完整故障树。3.提出实验室外环境泄漏检测、监测的方法,具体包括:1.物品表面采样检测方法;2.空气中病原体采样检测方法;3.污水中病原体采样检测方法;4.高压灭菌器灭菌效果检测方法;5.高效过滤器过滤效率检测方法;6.管道密封性能检测方法。4.确立各检测、监测方法的适用范围、试剂材料、采样检测方法、结果判断等技术标准。5.开展物品表面采样检测方法的验证实验,证实该方法能实现采样区域目标菌含量101cfu以上的采样评价。6.评价污水中病原体采样检测方法,确定了膜过滤法能正确检测含菌量101cfu的待测液体中的细菌含量;从污水处理系统的现场试验,可见该方法的检测灵敏度能达到100cfu,并验证了某实验室待测污水处理系统暂时不能满足灭菌要求。7.提出各个泄漏途径风险控制的综合措施方案,供BSL-3实验室安全管理参考。