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喹赛多作为喹嗯啉类药物的新品种,具有良好的抗菌促生长作用,并且具有毒副作用小、安全性高、用药后吸收快、消除迅速、残留期短、无积蓄作用等优点。实验室运用DDRT技术,从喹赛多作用下猪肝组织中筛选出7条差异表达的基因,分别是类胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor-1, IGF-1)、表皮生长因子(Epidermal Growth Factor, EGF)、ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymeras, PARP)、抗细胞凋亡因子1(The Defender Against Apoptotic Death1, DAD1)、补体C3(Complement Component3, C3)、转酮醇酶(transketolase, TK)和新基因。其中DAD1在阻止细胞凋亡中起作用；而C3补体能通过免疫系统的激活来发挥抗菌抗炎作用,以增加机体免疫力；转酮醇酶在磷酸戊糖途径发挥着关键作用,调节葡萄糖代谢,并以此影响着细胞的增殖等生命活动；EGF、IGF-1属于生长因子类,对于生长具有重要的作用,PARP与DNA的损伤修复有关。因此喹赛多的抗菌促生长作用可能与这7个基因的表达密切相关。由于信号通路是调节基因表达的一种重要方式,喹赛多是通过哪些信号通路来调控这7个基因,在调控这7个基因的信号通路中,主要的信号通路与喹赛多的药物作用有怎样的联系,是本论文所要解决的问题。1.PK-15细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路实验运用RT-qPCR技术,采用相对定量方法,用喹赛多(2lμM)作用于PK-15细胞分别作用0.5h-8h后对7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定。结果表明在PK-15细胞系中,喹赛多(2μM)作用之后,DAD1、TK、PARP、EGF、C3、新基因6个基因的mRNA表达水平在1h显著升高,IGF-1mRNA表达水平在喹赛多作用2h显著升高。运用RT-qPCR、Western Blot等技术,对PK-15细胞中喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明,PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase)、 NF-KB(Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer)信号通路对IGF-1的表达起主要作用,Erkl/2(extracellular signal-regulated kinasel/2)、JNK(c-Jun N-terminal kinase)、Jak2(Janus kinase)信号通路对IGF-1的表达可能起辅助作用；对于TK的表达,NF-κB信号通路对其表达起主要作用,Erk1/2、JAK2、PI3K、TGF-β(transforming growth factor)对其表达可能起辅助作用；PI3K、TGF-β、NF-κB信号通路对补体C3的表达起主要作用,Erk1／2起辅助作用；PI3K、NF-κB信号通路对PARP表达起主要作用,TGF-β、Erk1／2对PARP表达起辅助作用；对于DAD1的表达,研究表明,PI3K信号通路对其表达起主要作用,NF-κB、JAK2、TGF-β对其表达可能起辅助作用；PI3K、NF-KB信号通路对EGF表达起主要作用,TGF-β信号通路对EGF表达起辅助作用；PI3K、Erk1／2、NF-κB信号通路对新基因的表达起主要作用。总体来说,在PK-15细胞系中,喹赛多主要通过PI3K和NF-κB信号通路来调控其作用相关7个基因的表达。2.猪原代肝细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路实验运用RT-qPCR技术等技术,对喹赛多孵育猪原代肝细胞7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定,发现在猪原代肝细胞中,喹赛多孵育细胞0.5h后,新基因、DAD1mRNA表达水平显著升高,EGF mRNA表达水平升高且差异极显著；在1h时,IGF-1、TK、PARP mRNA表达水平升高且差异极显著；2h时,C3mRNA表达水平升高且差异极显著。运用RT-qPCR技术,对猪原代肝细胞喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明,在猪原代肝细胞中,PI3K是调节EGF的主要信号通路。JNK、PI3K是调节IGF-1的主要信号通路。喹赛多主要通过TGF-β信号通路来调节C3表达。喹赛多主要通过TGF-β、PI3K信号通路来调节DAD1表达。喹赛多主要通过TGF-β、P38、PI3K等信号通路来调节PARP表达。喹赛多主要通过ERK1／2、P38、TGF-β、JNK、PI3K等信号通路调节TK表达。对于新基因而言,其表达受多条信号通路的调节,其中最主要的是P38、TGF-β、JNK和P13K信号通路。综上所述,本研究首次对PK-15细胞系和猪原代肝细胞中喹赛多作用相关7个基因的时效关系进行测定,首次对PK-15细胞系和猪原代肝细胞中喹赛多对其作用相关7个基因的信号通路调控机制进行研究。研究表明,喹赛多在PK-15和猪原代肝细胞中的作用方式有相同,也有不同。相同点是在两个细胞中,喹赛多调节其作用相关7个基因的主要信号通路是相同的,都有PI3K这条与生长密切相关的信号通路。不同点：1,喹赛多诱导其作用相关7个基因表达的时效关系不同。2,喹赛多调节其作用相关7个基因表达的主要信号通路不同,在PK-15细胞上,NF-κB信号通路起主要作用,而在猪原代肝细胞中,NF-κB几乎没有作用。3,在两个细胞中,对新基因表达有调节作用的信号通路不同。由此推测,喹赛多主要是通过PI3K信号通路来调节其作用相关基因的表达,从而发挥药物作用。