目的：IL-23、IL-27是近来发现的IL-12家族的细胞因子，具有调节T细胞、B细胞及NK细胞的活性及增强机体抗感染免疫等生物学功能，是亚单位疫苗的潜在佐剂。在本室前期研究中，制备了针对A族链球菌（GAS）及呼吸道合胞病毒（RSV）的疫苗，即GAS的亚单位疫苗及DNA疫苗：重组Fba蛋白与pcDNA3.1/fba质粒；RSV亚单位疫苗；重组G1F/M2蛋白。将两种疫苗分别以IL-23质粒及IL-27质粒为佐剂接种小鼠，观察IL-23和IL-27对疫苗的免疫原性及保护性的影响，并进一步探讨其发挥作用的可能机制。　　 方法：　　 1.将pcDNA3.1/IL-23质粒、pcDNA3.1/IL-27质粒转染COS-7细胞行瞬时表达，Western blot检测IL-23及IL-27的表达。同时转染 pcDNA3.1/myc-HisB做为对照。　　 2.大量提取pcDNA3.1/IL-23质粒、pcDNA3.1/IL-27质粒、pcDNA3.1/myc-HisB质粒及pcDNA3.1/fba质粒，诱导并纯化Fba蛋白和G1F/M2蛋白。　　 3.动物实验：　　 3.1 GAS疫苗组的动物实验：　　 将雌性4周龄BALB/c小鼠随机分为6组，每组16只，分别为：pcDNA3.1/fba质粒+Fba蛋白组（简称GAS疫苗）、GAS疫苗+IL-23质粒组、GAS疫苗+IL-27质粒组、IL-23质粒组、IL-27质粒组、PBS对照组。Fba蛋白经皮下多点注射，质粒经肌肉注射进行免疫，共免疫4次，每次间隔10d。ELISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平；末次免疫后10d，每组一半动物处死，行流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+、CD8+细胞的变化；NK细胞杀伤试验检测小鼠脾脏细胞杀伤活性。每组的另一半动物给予链球菌攻击，以评价其对免疫小鼠的保护功效。　　 3.2 RSV疫苗组的动物实验：　　 将48只雌性4周龄BALB/c小鼠小鼠随机分为8组，分别为：G1F/M2蛋白+Al（OH）3组、G1F/M2蛋白+IL-23质粒组、G1F/M2蛋白+IL-27质粒组、G1F/M2蛋白+Al（OH）3+IL-23质粒组、G1F/M2蛋白+Al（OH）3+IL-27质粒组、G1F/M2蛋白+pcDNA3.1/myc-HisB质粒组、G1F/M2蛋白+PBS组、PBS对照组。G1F/M2蛋白经皮下多点注射，质粒经肌肉注射进行免疫，共免疫3次，每次间隔10d。末次免疫10天后处死小鼠，ELISA检测各免疫组血清3免后特异性IgG、IgG1和IgG2a水平；流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+、CD8+细胞的变化；CTL杀伤试验检测小鼠脾脏细胞杀伤活性。　　 结果：　　 1.Western-blot证实IL-23质粒、IL-27质粒成功转染COS-7细胞并表达IL-23和IL-27。　　 2.GAS疫苗组的动物实验　　 2.1免疫后小鼠IgG水平逐渐增高，GAS疫苗组效价可达到1：12800、GAS疫苗+IL-23质粒组效价可达到1：6400、GAS疫苗+IL-27质粒组效价可达到1：6400，三组间效价无显著差异。　　 2.2流式细胞检测结果显示各组CD4+T细胞、CD8+T细胞水平均较对照组显著增高，其中IL-23质粒加入组CD4+T细胞和CDs+T细胞水平显著高于其他组，IL-27质粒加入组CD4+T细胞水平显著高于GAS疫苗组，而CD8+T细胞水平与GAS疫苗组无显著差异。　　 2.3体外NK细胞自然杀伤试验显示：GAS疫苗组、GAS疫苗+IL-23质粒组、GAS疫苗+IL-27质粒组杀伤率明显高于其他三组，而三组间无明显差异。　　 2.4链球菌攻击后，PBS组小鼠在2d内全部死亡，而GAS疫苗组、GAS疫苗+IL-23质粒组、GAS疫苗+IL-27质粒组、IL-23质粒组及IL-27质粒组、PBS组生存率分别为43.8％、49％、57.5％、25％、18.6％、1.4％，GAS疫苗+IL-23质粒组、GAS疫苗+IL-27组保护率较GAS疫苗组显著增高，两组之间无显著差异。GAS疫苗组高于IL-23质粒组和IL-27质粒组（P<0.05）。IL-23质粒组和IL-27质粒组高于PBS，组两组之间无显著差异。　　 3.RSV亚单位疫苗的动物实验　　 3.1免疫小鼠血清抗体效价结果显示与PBS组相比，G1F/M2+Al（OH）3、G1F/M2+Al（OH）3+IL-23以及G1F/M2+Al（OH）3+IL-27组均诱导了高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体（P<0.05），且G1F/M2+Al（OH）3+IL-23和G1F/M2+Al（OH）3+IL-27组的抗体效价显著高于G1F/M2+Al（OH）3组。G1F/M2+IL-27组的各种抗体水平与G1F/M2+PBS组相比无显著性差异（P<0.05）；G1F/M2+IL-23组的抗体水平显著低于G1F/M2+PBS组。　　 3.2取免疫后小鼠脾细胞，经流式细胞仪分析，结果显示各实验组的CD4+T细胞、CD8+T细胞水平均较PBS对照组有显著增高（P<0.05）；其中G1F/M2+IL-23和G1F/M2+Al（OH）3+IL-23刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞水平显著高于其他组（P<0.05）。这些结果表明：IL-23可以显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖，促进细胞免疫应答；而IL-27的作用不明显。　　 3.3 LDH法检测CTL对靶细胞的特异杀伤活性，各组除PBS组外均诱导了G1F/M2蛋白特异性CTL应答，各组杀伤率较PBS对照组明显增高。G1F/M2+IL-23和G1F/M2+IL-27组的CTL与G1F/M2+PBS组相比没有显著性差异，即单独的IL-23或IL-27对G1F/M2诱导的杀伤活性没有增强作用；G1F/M2+Al（OH）3+IL-23和G1F/M2+Al（OH）3+IL-27组的杀伤率显著高于G1F/M2+Al（OH）3组。　　 结论：　　 1.获得成功表达IL-23、IL-27的真核质粒。　　 2.GAS疫苗组的动物实验显示　　 IL-23质粒可以明显增强GAS疫苗的细胞免疫效果，而IL-27增强效果不明显。二者均加强了疫苗的保护效果。可能IL-23比IL-27能更明显的增强GAS疫苗的免疫效果。　　 3.RSV疫苗组的动物实验表明　　 IL-23质粒和IL-27质粒可以增强Al（OH）3的佐剂效应。单独IL-27质粒不能增强体液免疫应答，而单独IL-23抑制G1F/M2诱导的体液免疫应答。IL-23可以显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖，促进细胞免疫应答；而IL-27的作用不明显。IL-23或IL-27与Al（OH）3联合使用，对G1F/M2诱导的CTL具有协同刺激作用。