被毛孢OWVT-1丝氨酸蛋白酶的分离纯化、性质研究及基因克隆

来源 :中国农业科学研究院研究生院生物防治研究所 中国农业科学院生物防治研究所 | 被引量 : 8次 | 上传用户:aiwho
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洛斯里被毛孢(Hirsutella rhossiliensis)是通过黏性孢子黏着于线虫并侵染和消解线虫的线虫内寄生真菌.由于在自然界中对线虫寄生率高、寄生性强、与线虫抑制性土壤有关、自然条件下为专性寄生菌,因而极具生防应用潜力.OWVT-1是该实验室筛选出的一株洛斯里被毛孢高效生防菌株.食线虫真菌丝氨酸蛋白酶的研究,为真菌侵染线虫的分子机理提供理论基础,同时对丝氨酸蛋白酶基因的分离,为改良及构建工程菌株提供坚实的基础.该研究利用线虫诱导下OWVT-1菌株液体发酵,通过粗分级分离、离子交换层析和凝胶过滤层析分离提纯了一个分子量为31kDa的丝氨酸蛋白酶,生物学测定表明其对大豆胞囊线虫二龄幼虫具有致死作用,同时测定了该酶理化特性,酶活力在75℃附近酶活力最高,随着pH的增加酶的稳定性升高,与胆碱脂酶具有相似的pH曲线,对特异性底物AAPE(Suc-Ala-Ala-Pro-Glu-PNA)具有作用,SSI和CI-2抑制该酶的活性.
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