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目的:观察ING4基因在肿瘤发生中转录水平的变化和突变情况;克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,改造慢病毒表达载体并构建ING4基因慢病毒表达载体PNL-ING4.
结果:RT-PCR表明在LTEP-a-2、SW480、LSC、Hela、PC3、F6、GC-MSC、hBM-MSC、UVEC-304、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中有不同水平ING4基因表达,其中LSC、ALL和CML患者骨髓中表达量较低,而在A549和胃癌患者癌组织中表达量极低。定量PCR显示,ING4基因在A549、LTEP-a-2,SW480,GC-MSC,PC3,Hela.UVEC-304,hBM-MSC和F6中均有表达,表达量以A549最低,F6最高,而UVEC-304和hBM-MSC居中。全长测序显示,在hBM-MSC第七代和第九代、LSC、SW480、F6、CML患者骨髓中均发现缺失及错配,缺失大部分发生在NLS域内,错义突变和移码突变也有发现。且随着骨髓问质干细胞传代数目的增多,点突变和缺失的频率也越来越高。从hBM-MSC中克隆ING4基因全长并改造慢病毒表达载体PNL-ires,构建了PNL-ING4慢病毒表达载体,双酶切和基因测序正确。包装293T细胞后可见绿色荧光,转染效率可达80%以上,并可检测出ING4基因的表达。
结论:ING4基因在不同肿瘤细胞中呈不同水平的表达,部分表现出表达产物发生突变。这些因素都是通过改变ING4的表达水平或生物活性,参与肿瘤的发生,特别值得关注的是,在MSC体外突变致瘤中,ING4表达突变是其中一个重要原因。成功构建ING4慢病毒表达载体PNL-ING4,为研究ING4基因在肿瘤发生中的作用与肿瘤基因治疗奠定基础。