膝前交叉韧带重塑部位及其分子机制初探

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ks00459
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目的:本文研究前交叉韧带不同分束在前交叉韧带损伤修复中的作用,探讨是否前交叉韧带的前内侧在前交叉韧带中较后外侧束作用更大。方法:随机抽取本院2010年6月至2012年10月具有术前MRI资料并进行膝关节镜探查的病例进行回顾性分析,通过膝关节MRI矢状位及斜矢状位双维扫描,检测前交叉韧带前内侧束、后外侧束的长度、厚度、宽度及胫骨止点之前和胫骨止点之后的长度。在无菌环境下,从10具自愿捐赠的新鲜尸体上取膝关节,并取出膝关节交叉前韧带,根据ACL的解剖形态学特点和膝关节不同伸屈角度下的紧张状态,将ACL分成前内侧束和后外侧束两个功能纤维束,束间被疏松结缔组织和血管分离。通过生物动力学测试了前交叉韧带不同部位的结构和力学特点,在肌腱恢复后行拉断试验,记录负荷-延长曲线,并根据此前测得的初长度及横截面积按以下公式计算最大应变和最大应力;提取总RNA,并反转录成cDNA后,应用实时定量PCR检测前内侧束和后外侧束中与肌腱修复相关的常见MMPs基因;再通过将ACL的前内侧束和后外侧束两个功能纤维束,经固定、石蜡包埋,利用MMP-2和MMP-3的多克隆抗体为一抗,进行免疫组化实验;将前内侧束和后外侧束两个功能纤维束中的组织分别收集,匀浆后提取总蛋白,用Western blotting分析不同分束中MMP-2、MMP-3的表达量,将WB条带进行灰度扫描,灰度和条带面积的乘积即为各蛋白相对表达水平。检测了MMPs在前交叉韧带不同部位中的表达水平。结果:1.通过影像学和生物动力学测试了前交叉韧带不同部位的结构和力学特点;前内束的最大应力和最大应变比后外束的大,进一步说明前交叉韧带的胫骨止点的前部具有成为临床肌腱重建最佳部位的潜力,为今后的临床应用提供理论基础。2.用RT-PCR、免疫组化、western-blot检测了MMPs在前交叉韧带不同部位中的表达水平,结果表明MMP-2在前内束表达较高,在后外侧束的表达较低;MMP-3在前内侧束表达较低,在后外侧束的表达较高,进一步说明包含胫骨前端的前内侧束比后外侧束更具有重塑潜力。结论:包含胫骨前端的前内侧束比后外侧束更为重要,ACL胫骨止点前方更具有成为临床肌腱修复和重塑的潜在位点。
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