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《2015中国禁毒报告》显示[1],全国共破获毒品犯罪案件14.59万起,缴获各类毒品合计68.96吨,其中冰毒类毒品25.9吨,氯胺酮11.2吨,海洛因9.3吨、大麻4吨。全国累计登记吸毒人数295.5万名,其中滥用新型毒品人员达145.9万名,占吸毒人数的49.4%,首次超过海洛因滥用群体比例49.3%,且在新型毒品滥用者中,滥用甲基苯丙胺人员达119万,占新型毒品吸毒人数的81.6%,说明中国毒品滥用结构发生了深刻的变化;以甲基苯丙胺为主体的苯丙胺类兴奋剂(AST)滥用与依赖在我国和世界范围内快速蔓延,大有取代海洛因、可卡因等传统毒品的趋势,我国面临着继海洛因之后的甲基苯丙胺滥用的威胁。云南省地处我国西南,其边境地区环境优美,气候宜人,民族众多,边境贸易繁荣,自古就是历史文化风景名胜。自改革开放以来,从“金三角”毒源地经我国云南边境地区的毒品运输量愈来愈大,毒品运输愈加频繁,严重危害边境人民的正常生活和正常的经济秩序,也使得我国从过去毒品的过境国逐步变成制造、生产、销售和消费“一条龙”式的受害国。目前由于新型毒品尤其以甲基苯丙胺(冰毒)滥用人群较多,故本研究就甲基苯丙胺对肾脏损伤予以探讨。[目的]探讨滥用新型毒品甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)对肾脏损伤机制的研究,本研究分为两部分,第一部分为研究甲基苯丙胺损伤人肾近曲小管上皮细胞(HK-2cells,HK-2细胞),采用MTS法进行细胞毒试验及细胞凋亡情况,以及急性损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)、肾损伤因子(Kim-1)的表达、分泌特点,并对其在甲基苯丙胺肾毒性损伤中的意义进行探讨。第二部分建立甲基苯丙胺对大鼠模型肾脏损伤模型,研究甲基苯丙胺对大鼠肾损伤机制。[方法]观察甲基苯丙胺对人肾近曲小管上皮细胞损伤作用。实验分组如下:正常对照组(仅加入培养液),对照组采用浓度分别为0.75mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L、12mmol/L、16mmol/L甲基苯丙胺作用于体外培养人肾近曲小管上皮细胞,通过MTS法观察甲基苯丙胺对HK-2的影响,流式细胞术观察细胞周期改变和凋亡情况,ELISA法检测培养上清中Ngal与Kim-1的分泌情况。通过建立甲基苯丙胺急性、亚急性、慢性大鼠模型,取大鼠肾组织进行切片、HE染色及电镜扫描。[结果](1)甲基苯丙胺作用人肾小管上皮细胞24h,显微观察细胞形态病使用MTS法测定细胞生存率。甲基苯丙胺在0.75mmo1～16mmol/L浓度范围内,随着甲基苯丙胺浓度的增加,HK-2细胞的生存率相应降低。增殖实验结果显示:与相同时间内的对照组相比,浓度达6mmol/L～16mmol/L时甲基苯丙胺作用HK-2细胞24h差异有统计学意义(P<0.05)。(2)甲基苯丙胺诱导HK-2细胞凋亡结果:0.75mmol/L 组:20.51%;1mmol/L 组:24%;1.5mmol/L 组:31.96%;2mmol/L 组:30.15%;3mmol/L 组:31.8%;4mmol/L 组:26.9%;6mmol/L 组:99%;8mmol/L 组:98%;12mmol/L 组:99.16%;16mmol/L 组:99.8%。(3)NGAL结果:8mmol/L组与对照组在相比,在12h内,随着作用时间延长,肾小管上皮细胞分泌NGAL量增加。12h后肾小管上皮细胞分泌NGAL逐渐减少。(4)KIM-1结果:8mmol/L组与对照组在相比,在48h内,随着作用时间延长,肾小管上皮细胞分泌KIM-1量增加。[结论](1)甲基苯丙胺对HK-2细胞的有抑制增殖作用,浓度达6mmol/L～16mmol/L时甲基苯丙胺作用HK-2细胞24h抑制作用越强。(2)甲基苯丙胺对HK-2细胞的促进凋亡。(3)在12h内,随着作用时间延长,肾小管上皮细胞分泌NGAL量增加。12h后肾小管上皮细胞分泌NGAL逐渐减少。(4)随着作用时间延长,肾小管上皮细胞分泌KIM-1量增加。(5)MA对肾脏有明显毒性作用。