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目的:通过研究和胃安神法组方治疗PCPA致失眠模型大鼠血清Th1/Th2平衡及其中脑中缝背核区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达情况的影响,探讨基于中缝背核区域调节睡眠的和胃安神方治疗失眠的作用机理。方法:选取32只SPF级Wistar雄性大鼠,按照随机数字表方法分为空白组、模型组、西药地西泮组及中药和胃安神方组,每组8只。采用经大鼠腹腔注射化学制剂对氯苯丙氨酸(PCPA)水溶液,构建失眠大鼠模型,除空白组外,对其余各组大鼠进行PCPA水溶液经大鼠腹腔注射,每天1次,连续2天。造模第3日开始各组大鼠均按10ml/kg体重进行相应方式灌胃,每天1次,连续灌胃7天,其中和胃安神方组给予同体积的中药水煎液(即17.5 g/kg d原药材,给药等效剂量按照成人日服用量的7倍换算),地西泮组给予同体积浓度为92 mg/(L·d)水溶液,空白组与模型组均给予等量生理盐水。灌胃7天后对各组大鼠进行经腹腔注射10%水合氯醛(0.3 ml/100g)麻醉,腹主动脉采血并离心取血清,冰上固定取脑组织,各标本低温保存待测。采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测各组实验大鼠血清中IFN-y、TNF-α、IL-4及IL-10含量,采用免疫组化法检测GFAP、BDNF在中缝背核区域的表达情况,在光镜下观察并采集图像,选用Image Pro Plus 6.0(IPP6.0)图像处理软件对中缝背核区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)阳性反应物进行平均光密度值(MOD)的测定。结果:1、大鼠行为学及体重变化情况经PCPA法造模后,观察到造模各组大鼠毛发杂乱和脱落,昼夜节律消失,白天躁动不安,与空白组均有较明显的不同,结合戊巴比妥钠翻正实验情况,提示造模成功;经过相应方式灌胃处理后,与模型组(230.50±8.35g)比较,地西泮组(245.75±11.87g)、和胃安神方组(241.78±12.06g)大鼠体重均明显增加(P<0.01;P<0.05)。2、大鼠血清Th1/Th2含量变化与模型组(32.846±8.247pg/ml)比较,和胃安神方组IFN-γ含量(40.154±5.979pg/ml)显著升高(P<0.05);与模型组(18.222±3.706pg/ml)比较,和胃安神方组TNF-α含量(9.802±2.908 pg/ml)显著降低(P<0.01);与模型组(46.921±5.386 pg/ml)比较,和胃安神方组 IL-10 含量(38.352±2.939 pg/ml)显著降低(P<0.01);与模型组(8.720±1.116pg/ml)比较,和胃安神方组IL-4含量(7.659±1.616 pg/ml)下降(P>0.05);IFN-γ/IL-4 比值(3.794±0.890 vs 5.294±0.752)显著升高(P<0.01)。3、大鼠中脑中缝背核GFAP表达变化各组中缝背核GFAP阳性反应物在细胞浆内呈棕色表达,胞核呈浅蓝色,胞质染色呈星形状,突起长短不一。如图所示,模型组GFAP阳性产物表达较少,空白组、地西泮组与和胃安神方组GFAP 阳性产物表达较多。与空白组(0.0034±0.0010)比较,和胃安神方组大鼠中脑中缝背核GFAPMOD(0.0035±0.0011)升高不明显(P>0.05);与模型组(0.0023±0.0014)比较,空白组(0.0034±0.0010)、地西泮组(0.0033±0.0010)、和胃安神方组(0.0035±0.0011)大鼠中脑中缝背核GFAP MOD均显著增加(P<0.01;P<0.05;P<0.01)。4、各组大鼠中脑中缝背核BDNF表达变化经免疫组化后大鼠中脑中缝背核BDNF 阳性反应物在细胞浆或细胞核呈黄色与棕褐色不等。如图所示,空白组和模型组BDNF 阳性产物表达较少,地西泮组与和胃安神方组BDNF 阳性产物表达较多。与空白组((0.00848±0.00115)比较,地西泮组(0.00978±0.00124)、和胃安神方组(0.00955±0.00206)大鼠中脑中缝背核BDNF MOD均显著增加(P<0.01;P<0.05);与模型组(0.00846±0.00184)比较,地西泮组(0.00978±0.00124)、和胃安神方组(0.00955±0.00206)大鼠中脑中缝背核BDNF MOD均显著升高(P<0.01;P<0.05)。结论:和胃安神方治疗失眠的作用机制可能与通过升高血清IFN-γ/IL-4比值使Th1/Th2的平衡向Th1方向偏移、增加中缝背核区域GFAP的表达、增加中缝背核区域BDNF的表达等,从而对机体免疫系统和中枢神经系统进行调控有关。