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卵转铁蛋白(ovotransferrin,OVT)是鸡蛋蛋清的主要组成蛋白,该蛋白及其酶解物具有免疫调节和抗病毒等其它生物活性。巨噬细胞是机体天然细胞免疫体系的重要组成部分,参与机体防御和免疫,是机体抵御外来病原体入侵的一道重要屏障。为了探究卵转铁蛋白及其酶解物对巨噬细胞抗病毒作用的影响,本研究首先用卵转铁蛋白及其酶解物孵育小鼠腹腔巨噬细胞,再用猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)侵染细胞,通过荧光定量PCR、ELISA和Western Blot等试验方法来测定卵转铁蛋白及其酶解物对巨噬细胞抗病毒作用的影响。为卵转铁蛋白及其酶解物的应用提供理论依据,开发禽蛋深加工与利用的新方向,同时也为活性蛋白增强机体抗病毒天然免疫的研究提供研究基础。主要研究结果概括如下:⑴10 ng/m L、1μg/m L和100μg/m L的OVT及其酶解物分别孵育小鼠腹腔巨噬细胞,经病毒侵染后采用荧光定量PCR检测PRRSV m RNA的表达量,试验结果表明,100μg/m L卵转铁蛋白能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对PRRSV的抑制作用,而10 ng/m L的卵转铁蛋白和10 ng/m L的卵转铁蛋白胃蛋白酶水解物对PRRSV的增殖反而有显著的促进作用。⑵10 ng/m L、1μg/m L和100μg/m L的OVT及其酶解物分别孵育小鼠腹腔巨噬细胞,经病毒侵染后采用荧光定量PCR和ELISA分别检测I型干扰素和促炎细胞因子的基因和蛋白表达量,试验结果表明,100μg/m L的卵转铁蛋白能促进巨噬细胞I型干扰素(IFN-α和IFN-β)和促炎细胞因子(IL-1β和TNF-α)的分泌,抑制抑炎细胞因子(IL-10)的分泌,从而促进炎症反应,增强巨噬细胞的抗病毒作用。相反地,10 ng/m L的卵转铁蛋白能抑制巨噬细胞I型干扰素(IFN-α和IFN-β)和促炎细胞因子(IL-1β和TNF-α)的分泌,促进抗炎细胞因子(IL-10)的分泌,产生了抑炎反应,促进了病毒的增殖作用。另外,10 ng/m L的卵转铁蛋白胃蛋白酶解物能抑制巨噬细胞I型干扰素(IFN-α和IFN-β)和抑炎细胞因子(IL-10)的分泌,对促炎细胞因子无显著影响。⑶100μg/m L的OVT和10 ng/m LOVT胃蛋白酶水解物分别孵育小鼠腹腔巨噬细胞,经病毒侵染后采用Western Blot检测RIG-I、MDA5、My D88及其介导的NF-κB、AP-1、IRF3和IRF7的蛋白表达量,试验结果表明,卵转铁蛋白能通过促进RIG-I样受体(RLRs)和Toll样受体(TLRs)识别PRRSV的病原相关分子模式(PAMPs),激活下游AP-1、NF-κB、IRF3和IRF7信号通路,促进巨噬细胞I型干扰素和促炎细胞因子的分泌,从而增强巨噬细胞抗病毒作用。而卵转铁蛋白胃蛋白酶水解物则能通过抑制相关模式受体和信号衔接蛋白的表达,抑制了下游AP-1、IRF3和IRF7信号通路的活化,下调了巨噬细胞I型干扰素的表达量,从而无法抑制病毒的增殖作用。