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目的研究黄芪中三种成分黄芪甲苷(ASIV)、黄芪多糖(APS)、黄芪黄酮(FAC)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、细胞因子含量和基因表达水平、表面共刺激因子的分泌、细胞周期以及核因子κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响。方法选取处于对数生长期的RAW264.7细胞,分别加入终浓度为0、25、50、100μg/m L的ASIV,0、25、50、100μg/m L的APS以及0、0.1、1、10μg/m L的FAC,同时加入NF-κB的抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法测定药物最适添加浓度和细胞活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法分别测定白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量及细胞因子和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)m RNA表达水平;流式细胞仪测定CD40、CD80和CD86的含量及细胞周期;western blotting法测定ASIV对p50、p65、p-p65、p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白表达水平和FAC对p50、p65、p-p65蛋白表达水平的影响;EMSA方法测定APS对p65入核表达的影响。试验结果如下:1.ASIV对RAW264.7细胞免疫功能的影响与对照组相比,100μg/m L ASIV处理组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO含量及IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS m RNA表达水平均极显著升高(p<0.01);50μg/m L ASIV处理组IL-6的含量极显著升高(p<0.01),IL-1β、TNF-α和i NOS的m RNA表达水平显著或极显著升高(p<0.05或p<0.01)。与100μg/m L ASIV处理组相比,PDTC+100μg/m L ASIV混合处理组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO含量和IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS m RNA表达水平均显著或极显著降低(p<0.05或p<0.01)。ASIV促进CD40和CD86的分泌,增加处于G2/M期细胞的数目,促进细胞增殖。与对照组相比,25μg/m L ASIV处理组p-p65/p65比值极显著升高(p<0.01),50μg/m L ASIV处理组p50/β-actin、p-p65/p65、p-p38/p38比值及100μg/m L ASIV处理组所有比值均极显著升高(p<0.01),PDTC能够明显的减缓这种增加作用。2.APS对RAW264.7细胞免疫功能的影响与对照组相比,100μg/m L APS处理组IL-6、IL-1β、NO含量及IL-6、IL-1β、i NOS、TNF-αm RNA表达水平均极显著升高(p<0.01);50μg/m L APS处理组的IL-6的含量及m RNA表达水平和IL-1β的m RNA表达水平极显著升高(p<0.01);PDTC处理组的TNF-α和i NOS m RNA表达水平显著或者极显著降低(p<0.05或p<0.01)。与100μg/m L处理组相比,PDTC+100μg/m L混合处理组IL-6和NO含量及IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS的m RNA表达水平均极显著降低(p<0.01)。随着APS浓度增加,CD40和CD86的含量增加,添加PDTC具有抑制作用。100μg/m L APS处理组处于G2/M期的细胞数目增加。与对照组相比,25μg/m L APS处理组p65入核表达显著增加(p<0.05);50μg/m L与100μg/m L APS处理组p65入核表达极显著增加(p<0.01);与100μg/m L APS处理组相比,PDTC+100μg/m L APS混合处理组p65入核表达极显著减少(p<0.01)。3.FAC对RAW264.7细胞免疫功能的影响与对照组相比,1μg/m L与10μg/m L FAC处理组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO含量及IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS的m RNA表达水平均极显著提高(p<0.01)。PDTC组NO的含量,TNF-α和i NOS m RNA表达量显著或极显著降低(p<0.05或p<0.01)。与10μg/m L FAC处理组相比,PDTC+10μg/m L FAC混合处理组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO含量及IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS的m RNA表达水平均极显著降低(p<0.01)。FAC促进CD40和CD86的分泌,而PDTC抑制这种促进分泌作用。FAC能轻微的增加处于G2/M的细胞数量。与对照组相比,随着FAC浓度的增加,0.1μg/m L FAC处理组p50的表达量极显著升高(p<0.01),10μg/m L FAC组p50的表达量极显著降低(p<0.01),而PDTC能够进一步促进这种降低作用;与对照组相比,10μg/m L组p-p65/p65比值极显著增加(p<0.01)。与10μg/m L处理组相比,PDTC+10μg/m L FAC混合处理组p-p65/p65比值极显著减少(p<0.01)。结论ASIV可通过活化NF-κB/MAPK信号通路,APS和FAC可通过NF-κB信号通路不同程度地增强小鼠RAW264.7细胞的免疫功能。