贾第虫是一种呈全球性分布的常见致腹泻肠鞭毛原虫,由列文·虎克(Leeuwen Hoek)于1681年发现,宿主范围广泛,可引起包括人在内的多种脊椎动物腹泻,通过食物和水传播。本病呈世界性分布,自20世纪70年代以来,在世界各地发生了本病流行或暴发流行,因贾第虫病曾在国际旅游者中流行,故被称为“旅游者腹泻”,现已将其列入全世界危害人类健康的10种主要寄生虫病。随着社会经济发展,人与动物直接或间接接触机会越来越多,一些家畜和野生动物作为本虫宿主对人类卫生健康是一种潜在威胁。近年来,随着人民生活水平的提高,旅游业和伴随宠物的饲养得到快速发展以及世界上恐怖威胁的增加人们对食品和水安全的关注,贾第虫病已经越来越受到人们的重视。目前,我国尚未见贾第虫分子流行病学和基因分型的系统报道,我国人贾第虫是否由动物传播尚不得而知。笔者对河南省部分地区人贾第虫感染进行调查,并进行分子遗传特性研究,阐明人感染贾第虫与动物传播之间的关系。1.初步掌握林州市人肠道寄生虫感染情况,笔者以林州8个地区作为调查点,对共1949份粪便进行肠道寄生虫感染情况调查,共检出虫卵、卵囊和包囊6类,其中原虫3种(贾第虫、隐孢子虫、球虫)、线虫3种(蛲虫、蛔虫、钩虫)。本次调查共发现26例肠道寄生虫感染者,总感染率为1.33%(26/1949),其中贾第虫感染率为0.41%(8/1949),隐孢子虫感染率为0.15%(3/1949),蛲虫感染率为0.56%(11/1949),蛔虫感染率为0.10%(2/1949),钩虫感染率为0.05%(1/1949),等孢球虫感染率为0.05%(1/1949),未发现其它寄生虫及混合感染。2.初步掌握河南省部分地区人贾第虫的流行情况和形态特征,笔者于2007年7月至2008年12月间用卢戈式碘液染色法对河南省人民医院临床病人、林州8个地区0～15岁的儿童、开封地区两家大型医院住院病人贾第虫病的流行情况进行了调查。共调查7519份样品,发现23个人源贾第虫分离株,总感染率为0.31%(23/7519)。年龄从刚出生1天到高于100岁高龄,结果分析发现其中以0～6岁与7～10岁这两个年龄段的人感染率最高,其次是21～40岁,41～60岁和60～岁感染率相对较低,11～20岁感染率为零,不同年龄段人贾第虫感染率存在显著差异。从性别上看,男性的感染率为0.36%(14/932),女性的感染率为0.25%(9/3587),不同性别差异不显著。阳性样品在卢戈式碘液中包囊呈椭圆形,囊壁较厚。碘液染色后呈黄绿色,囊壁与虫体之间有明显的空隙,未成熟的包囊有2个核,成熟的包囊具4个核。囊内可见到鞭毛、丝状物、轴柱等。共测量106个贾第虫包囊,大小约为7～10μm×8～13μm。3.根据贾第虫TPI基因设计合成一套特异引物,对贾第虫基因组DNA进行巢式PCR扩增,并对退火温度进行优化,成功扩增出1条530bp左右长的目的片段,而其它3种寄生虫DNA样本均无此条带出现。由此说明引物对贾第虫基因组DNA的检测具有高度的特异性。结果表明所建立的巢式PCR方法,可为贾第虫病的临床诊断和流行病调查提供有意义的实验依据。4.人源和动物源贾第虫PCR诊断,基于TPI基因对河南地区人源和动物源贾第虫分离株进行特异性PCR扩增,巢氏PCR扩增TPI基因530bp长度序列。扩增结果表明,23份人源贾第虫有20份特异性扩增出产物,3份PCR阴性,22份动物源贾第虫全部扩增出产物。5.利用生物信息学技术确定贾第虫种类和基因型。对扩增出的42个贾第虫分离株的TPI基因部分序列进行测序,序列分析表明,所研究的20条人源贾第虫序列之间存在差异性。11个分离株属于聚集体A1,2个属于聚集体A2,一个是聚集体B,与GenBank上发表的序列比较存在不同的碱基差异,命名为亚型B1。另外有4个分离株与聚集体A比较在不同碱基位点上存在差异,命名为亚型A4-A6。序列分析表明,22个动物源贾第虫分离株中有11个与蓝氏贾第虫聚集体A相同,另外11个与蓝氏贾第虫聚集体B相同。其中2个与聚集体A亚型1完全相同,1个与聚集体A亚型2完全相同,聚集体A中发现6个新亚型,另有3个分离株在相同碱基位点上出现了差异,命名为A7；另外5个分离株在不同的碱基位点出现了差异,分别命名为A4、A8-A11；11个聚集体B中有6个分离株与聚集体B在不同碱基位点存在差异,为聚集体B新的亚型,分别命名为亚型B6-B9。结果表明,在蓝氏贾第虫内部存在不同得基因型或基因亚型,河南省贾第虫分离株共42株,通过分子鉴定表明存在17个不同的亚型,其中新亚型有14个。本试验结果为河南省贾第虫病的流行情况和种类或基因型提供参考。