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主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子可将外源性抗原提呈给T辅助细胞。MHC-Ⅱ类的组成型表达仅限于“专职性”抗原提呈细胞，但细胞因子如．IFN-γ可引起诱导型Ⅱ类分子表达。无论是组成型还是诱导型Ⅱ类分子表达，MHC．Ⅱ类分子转录活化因子(CⅡTA)都是绝对必需的。近年的研究提示CⅡTA是控制MHC-Ⅱ类基因表达的主宰调节者，决定着MHC-Ⅱ类分子的存在与否及表达程度，也决定了免疫应答的本质。作为影响一个大基因家族的单个基因或蛋白质，CⅡTA是对MHC-Ⅱ类的抗原提呈过程进行干预的理想靶点，可以在自身免疫损伤和移植排异过程中进行免疫抑制干预。反义核酸技术是根据碱基互补原理，使用与目标靶的遗传物质(mRNA或DNA)特定互补的核酸片段封闭基因表达的技术方法。作用的机理是导入靶基因的互补的核苷酸，通过序列特异性和非序列特异性反义作用，与基因组相应mRNA或双链DNA结合，形成部分双链分子或三链核酸，从而定向封闭靶基因，阻断相应基因的表达，以达到治疗或是部分治疗的目的。本研究设计以CⅡTA mRNA为模板的反义cDNA片段，从CⅡTA基因5’端第94位到500位核苷酸段设计引物，目的片段407bp，覆盖第116和188位两个AUG密码子，也包含了第一外显子和第二外显子间的剪接位点：用常规分子生物学方法构建了反义片段的腺病毒表达载体(pAdEasy-1系统)；腺病毒载体经HEK293细胞包装产生含反义片段的重组腺病毒，用氯化铯密度梯度离心法获得纯化的高滴度腺病毒；进行体外基因转移，分别用反义片段真核表达载体转染P388D1细胞和用重组腺病毒感染HeLa细胞，观察导入的CⅡTA基因反义RNA抑制细胞内组成型或诱导型CⅡTA基因表达的作用，从而达到调控MHC-Ⅱ类分子表达的目的。结果显示：含反义CⅡTA的真核表达载体转染组成型MHC-Ⅱ类分子表达P388D1细胞株，经抗生素抗性筛选后表达MHC-Ⅱ类分子的细胞阳性率比对照组下降65． 7％，平均荧光强度下降40． 1％。携带反义CⅡTA的重组腺病毒感染诱导 硕士论文 范 荣 型MHC－11类分子表达HeLa细胞株，使IFN－Y诱导表达MHC－11类分子的细胞阳 性率比对照组下降5～24％（平均15％）；平均荧光强度下降58～83％（平均74％）。 T细胞激活抑制实验表明：由于重组腺病毒携带的反义 C 11 TA片段，不同程度地抑 制了HeLa细胞诱导型MHC二类分子的表达，使主要识别MHC－11类分子相容性 不同的T淋巴细胞活化受到不同程度的抑制，表现为T细胞激活标记物CD25和 CD69表达的阳性率和平均荧光强度均下降，其中一例 CD25阳性率降低 17．l％， 平均荧光强度降低 50．8％，CD69阳性率降低 16．7％，平均荧光强度降低 56．7％。 上述结果表明：反义 C 11 TA可以部分抑制组成型和诱导型 MHC刁类分于的表达， 导致T细胞活化受到影响。