目的本实验目的在于建立神经干细胞培养方法,观察人工脑脊液(ACSF)中不同浓度的苯巴比妥钠(PBS)对新生大鼠脑源性神经干细胞分化成熟的影响。方法从SD新生大鼠大脑分离、培养神经干细胞,采用无血清培养。免疫细胞化学方法检测神经干细胞特征性标志神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达,用5-溴尿嘧啶核苷(BrdU)检测细胞增殖活性。用四甲基偶氮唑盐法(MTT)观察不同浓度人工脑脊液对神经干细胞存活率的影响。不同浓度苯巴比妥钠在神经干细胞分化中的作用采用免疫组化来检测,并采用扫描电镜对分化后的细胞形态进行观察。结果(1)经过体外培养获得的神经干细胞能够分化成为神经元和神经胶质细胞,具有多向分化能力,同时有很强的自我更新能力;神经球能够表达Nestin和BrdU,传代培养的神经干细胞性能稳定,经过长期培养后能够保持神经干细胞特点。(2)MTT检测显示,≥40%的人工脑脊液能够明显降低神经干细胞的存活率。(3)免疫细胞化学结果显示,随着人工脑脊液中的苯巴比妥钠浓度的增高,诱导分化后的细胞中神经元百分比逐渐降低,神经胶质细胞百分比逐渐升高,当ACSF中的苯巴比妥钠浓度为10μg/ml时,可显著降低NSCs分化为MAP 2染色阳性细胞的百分率(P＜0.01),当ACSF中的苯巴比妥钠浓度为25μg/ml时,可显著增高NSCs分化为GFAP染色阳性细胞的百分率(P＜0.01)。(4)扫描电镜观察实验组诱导分化后的神经元不具备正常神经元行使功能的形态结构。结论建立了体外培养大鼠神经干细胞的方法,培养的神经干细胞表达Nestin,有自我更新、多向分化的特点。人工脑脊液中的苯巴比妥钠能够抑制神经干细胞向神经元方向分化,促进其向星型胶质方向分化,且降低了分化后的正常神经元比率。