【摘 要】
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目的:证实脓毒症早期存在肠道菌群失调,观察粪菌移植对脓毒症的治疗效果,探讨粪菌移植能否重建脓毒症小鼠肠道菌群,及其对肠粘膜屏障功能是否具有保护作用。方法:实验用级清
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目的:证实脓毒症早期存在肠道菌群失调,观察粪菌移植对脓毒症的治疗效果,探讨粪菌移植能否重建脓毒症小鼠肠道菌群,及其对肠粘膜屏障功能是否具有保护作用。方法:实验用级清洁级雄性C57BL/6小鼠(6-8周龄,体重20g-25g),适应性喂养1周后纳入实验。实验分为急性期实验和7天死亡率观察实验。急性期实验用随机数字法将实验动物随机分为三组,即假手术组(Sham组,S组)(n=18,n=6/时间组)、脓毒症模型组(CLP组,C组)(n=31,n=10/11/时间组)、粪菌移植组(FMT组,T组)(n=31,10/11/时间组)。死亡率观察实验用同样方法分为上述三组,n=10/组。Sham组只行剖腹,不做盲肠结扎穿孔;CLP组、FMT组行盲肠结扎穿孔术制作脓毒症模型,结扎部位及穿孔大小保持一致。留取10只小鼠新鲜粪便制作粪菌液。Sham组与CLP组予以磷酸盐缓冲液每天灌胃一次,FMT组每天给予粪菌移植一次。操作于每天固定时间同时进行。所有实验动物均接受同样的食物和水,饲养于同一环境。分别于建模后12h、24h、48h处以安乐死并取血、结肠及粪便。结果:脓毒症模型组7天生存率50%,明显低于假手术组和粪菌移植组,具有统计学差异。粪菌移植后小鼠结肠病理评分、凋亡细胞及促炎细胞因子表达、TLR4/My D88/NF-κB蛋白水平及m RNA水平均更低,而抗炎因子、粘液层厚度、MUC2及occludin、ZO-1蛋白表达更高。菌群分析显示粪菌移植后菌群存在重建,其丰度和多样性均高于脓毒症小鼠,差异物种分析Lachnospiracea在L-赖氨酸发酵为乙酸和丁酸的途径中贡献最大。结论:脓毒症早期即发生肠道菌群失调。早期应用粪菌移植能够有效降低脓毒症小鼠死亡率,移植后菌群丰富度及多样性均有所恢复,并且朝着供体的微生物特征转变,并且能够有效减少上皮细胞凋亡,改善粘液层组成及紧密连接蛋白表达,降低肠道通透性和炎症反应,从而保护肠屏障功能。粪菌移植后Lachnospiracea在L-赖氨酸发酵成乙酸和丁酸通路贡献最大,可能是短链脂肪酸代谢的关键菌。
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