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伪狂犬病（Pseudorabies）是当今危害养猪业的最重要传染病之一，免疫接种仍是目前控制和预防该病的主要手段。传统的猪伪狂犬病疫苗对控制疾病的发生和流行发挥了巨大作用，但存在毒力返强的安全隐患或免疫效果不佳等缺陷。研制更安全、高效、廉价的新型疫苗一直是伪狂犬病研究的重要方向。 近年来伪狂犬病DNA疫苗研究很多，尤其是伪狂犬病毒的囊膜蛋白gB、gC和gD为主要抗原基因的核酸疫苗报答较多。伪狂犬病毒的囊膜蛋白gB、gC和gD是病毒感染细胞的几个关键步骤中所必需的基因。正是因为如此以伪狂犬病毒的囊膜蛋白gB、gC和gD为靶抗原的核酸疫苗首免后能够比传统疫苗更有效的减少宿主感染病毒后的排放，尤其宿主在有母源抗体存在的情况下应用核酸疫苗能够更好的起到更好的免疫保护作用。然而核酸疫苗的最大缺陷是产生的抗体水平低和较慢，目前报道的可以增强伪狂犬病毒核酸疫苗的方法中有应用辛巴病毒作为载体，GM-CSF因子作为佐剂，CpG修饰，IL-2，IFN-γ等佐剂。然而尽管核酸疫苗尽管可以诱导产生比较不错的细胞免疫水平但是其产生的中和抗体水平相对于灭活和弱毒疫苗过低。补体C3d能够与靶抗原结合并有效增强抗原的体液免疫反应，C3d作为补体被抗原激活后的最后裂解产物与抗原融合表达后可以显著增强融合蛋白的免疫原性。 鉴于上述研究背景，本研究探讨了补体C3d和补体C3d的受体结合功能区M28作为分子佐剂对伪狂犬病毒最主要的保护性抗原基因gC基因的免疫增强作用，同时研究了猪源补体C3d与伪狂犬病毒gC基因融合表达的核酸疫苗的免疫效果。主要研究内容如下： 1．猪、鼠、羊补体C3d基因的克隆与序列分析 从猪、鼠、羊肝脏细胞提取总RNA，通过RT-PCR扩增出猪、鼠、羊补体C3d基因，并进行了序列测定、糖基化位点进化系统分析与序列比较，发现鼠源补体C3d基因全长897bp编码299个氨基酸，与人补体C3d核苷酸序列同源性为83％，牛与羊的C3d基因的同源性达到了94％，猪与羊、牛、人的C3d的同源性差不多都在80％左右。 2．补体C3d与gC基因融合表达重组质粒的构建和表达 以pcDNA3.1+载体作为骨干，分别构建了分泌型表达的gC基因的常规DNA疫苗表达质粒sgC和多拷贝的鼠源补体C3d分子和M28与伪狂犬病毒gC基因融合表达的DNA疫苗sgC-C3d3、sgC-M284，同时构建了猪源补体C3d分子与伪狂犬病毒gC基因融合表达的DNA疫苗sgC-sC3d3。将重组表达质粒转染PK-15细胞，Western blot检测证实两种表达质粒均能分泌表达gC重组蛋白。