卵黄抗体不仅可以对特定的病原起到很好的防控效果,同时由于卵黄抗体自身含有丰富的营养物质可以作为饲料添加剂提高动物的生长性能。因此,通过抗体蛋白饲料添加剂途径控制某些病毒性疾病不失为一种解决方法。猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种以呕吐、腹泻和脱水为主要临床特征的高度接触性、高度致死性的传染病,是仔猪健康的主要威胁,而常规的疫苗免疫母猪对仔猪的保护效果不佳。因此,研发抗猪腹泻的卵黄抗体饲料添加剂便成为新的研究热点之一。本研究从患有猪流行性腹泻仔猪肠道组织中克隆了猪流行性腹泻病毒S基因中抗原指数较高且含有中和抗原域的499～638aa(COE基因)和636-789aa(PEDVS534基因)两段基因。利用基因重组技术将COE和PEDVS534两个中和抗原表位区克隆至载体pMD18-T上,酶切后连接pET-32a表达载体在大肠杆菌中表达。将原核表达的CC、PEDVS534两种重组蛋白和猪流行性腹泻全病毒灭活苗分别用白油佐剂乳化,分组免疫9月龄海兰褐产蛋鸡,每组10只,共免疫3次,每次间隔两周。其中PEDVS534(?)口COE重组蛋白免疫组的一免剂量均为200μg/只,二免剂量为200μg／只,三免剂量为250μg/只；猪流行性腹泻全病毒免疫组的一免剂量为0.5mL,二免剂量为1.0mL,三免剂量为1.5mL。采用病毒中和试验检测卵黄抗体的中和效价。同时利用真核表达技术将COE基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K上,在毕赤酵母中表达。真核表达的COE重组蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,共免两次,每次间隔两周,首免剂量为60μg/只,二免剂量为80μg/只。二免后十天采血进行中和试验,测定血清的中和效价。结果显示,成功克隆了PEDVS534(534bp)和COE(530bp)基因,原核表达的PEDVS534蛋白和COE蛋白大小分别为37.5kDa和37.0kDa,与理论值相符,且表达的蛋白具有免疫原性。真核表达的COE蛋白大小为27kDa,比理论值偏大,可能是由于蛋白表达时发生了糖基化反应,表达的蛋白免疫小鼠产生的中和抗体效价达到1：36。原核表达的PEDVS534、COE蛋白和PEDV全病毒作为免疫原制备的卵黄抗体的中和效价分别为1：12、1：25和1：120。抗COE重组蛋白卵黄抗体临床试验结果显示卵黄抗体组仔猪死亡率为5.56%,而对照组的死亡率达到61.11%,而试验组和对照组仔猪的腹泻率差异不显著。利用毕赤酵母表达系统表达的COE蛋白具有很好的生物学活性,能够诱导机体产生中和抗体；成功制备了三种卵黄抗体,并且三种卵黄抗体均具有一定的中和病毒的能力；抗COE重组蛋白卵黄抗体在控制腹泻仔猪死亡率方面具有显著效果,为进一步研究以其作为饲料添加剂提供理论基础。