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目的:本项目以改善脂肪细胞增殖为切入点,实验以经典的3T3-L1前脂肪细胞为观察对象,一方面探求3T3-L1前脂肪细胞体外培养的最佳条件并积累培养经验;另一方面观察在胰岛素样生长因子1(IGF-1)及肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激下酸石榴乙酸乙酯提取物SPEAE、乙醇提取物SPEE、50%丙酮提取物SPAE;甜石榴乙酸乙酯提取物TPEAE、乙醇提取物TPEE、50%丙酮提取物TPAE,对3T3-L1前脂肪细胞的增殖作用,观察药物对其增殖及形态学的影响,初步探讨所给药(石榴)对脂肪细胞增殖发生发展的改善作用,并摸索其作用的量效和时效情况。为石榴临床应用提供初步的实验依据,为从民族民间医药中开发治疗IR的新药提供新的方法和思路。方法:1、3T3-Ll前脂肪细胞的增殖培养实验;2、SPEAE、SPEE、SPAE以及TPEAE、TPEE、TPAE对3T3-Ll前脂肪细胞的干预作用研究;3、SPEAE、SPEE、SPAE和TPEAE、TPEE、TPAE对IGF-1作用下的3T3-Ll前脂肪细胞增殖的干预作用研究;4、SPEAE、SPEE、SPAE和TPEAE、TPEE、TPAE对TNF-作用下的3T3-Ll前脂肪细胞增殖的干预作用研究。结果:1、3T3-Ll前脂肪细胞的增殖培养实验:经图片对比鉴定,培养出正常3T3-Ll前脂肪细胞,为下一步实验提供实验基础;2、不同质量浓度的SPEAE、SPEE、SPAE和TPEAE、TPEE、TPAE作用3T3-L1前脂肪细胞,整体呈现促进增殖的作用,呈现量效和时效关系:①、在24h时间点,随着SPEAE、TPEAE质量浓度的增加,促进增殖作用明显增强,优于48h和72小时;而单剂量浓度20μg/mL~100μg/mL间,同一质量浓度的SPEAE、TPEAE,随作用时间24h~48h,呈现一定抑制增殖作用;②、SPEE、TPEE及SPAE、TPAE作用时间24h、48h均呈现促进增殖的作用,72h作用不明显。3、不同浓度IGF-1刺激下对3T3-L1前脂肪细胞呈现明显增殖作用;对经实验筛选出的设定浓度IGF-1刺激下的3T3-L1前脂肪细胞,不同质量浓度的SPEAE、SPEE、SPAE和TPEAE、TPEE、TPAE均呈现相加的促进增殖作用,此作用呈现量效和时效关系:①、在24h时间点,随着SPEAE、TPEAE质量浓度的增加,促进增殖作用明显增强,优于48h和72小时;而单剂量浓度20μg/mL~100μg/mL间,同一质量浓度的SPEAE、TPEAE,随作用时间24h~48h,呈现一定抑制增殖作用;②、SPEE、TPEE及SPAE、TPAE作用时间24h、48h均呈现促进增殖的作用,72h作用不明显。4、不同浓度TNF-α对3T3-L1前脂肪细胞的增殖呈现明显抑制作用;对经实验筛选出的设定浓度TNF-α增殖受到抑制的3T3-L1前脂肪细胞,不同质量浓度的SPEAE、SPEE、SPAE和TPEAE、TPEE、TPAE显示对抗增殖抑制作用,此促进增殖的作用,呈现量效和时效关系;①、在24h时间点,SPEAE、TPEAE显示促进增殖作用较明显,但此促进增殖作用弱于无TNF-α干预作用时的强度;在浓度20μg/mL~100μg/mL区间,单剂量的SPEAE、TPEAE,在24h~48h时间段,随时间的延长,呈现一定抑制增殖作用;在48h时间点,SPEAE、TPEAE随着浓度的增加,均显示抑制增殖的作用;②、SPEE、TPEE和SPAE、TPAE的促进增殖作用时间,24h优于48h,48h优于72h。即随着作用时间的延长,促进增殖作用减弱;结论:酸石榴、甜石榴不同提取物对3T3-l1前脂肪细胞增殖的干预作用基本相似。其中,甜石榴促进增殖作用弱于酸石榴的作用,这可能与前者的含糖量少于后者有关。酸石榴及甜石榴的乙酸乙酯部分,单剂量随着作用时间增加显示明显的抑制增殖作用;而酸石榴及甜石榴的乙醇部分和50%丙酮部分则均显示促进增殖作用,这两部分属于大极性提取物,主要含糖,因而表现促进增殖作用。