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新一代婴幼儿配方乳粉的开发应使其具有和母乳相同或相似的生理功能,不仅在宏观成分和含量上,还要在微观组成上模拟母乳。因此,为实现婴幼儿配方乳粉的真正母乳化,对保护性营养物质的研究非常重要。保护性的免疫活性物是婴幼儿配方乳粉接近母乳的关键,代表了新一代婴幼儿配方乳粉的发展趋势,其中免疫球蛋白G——IgG是这些保护性的免疫活性物中的重要一种。由于婴幼儿配方乳粉中IgG含量与其他含IgG产品相比较低,所以目前尚缺乏准确可靠的测定方法。据此,本论文研究了检测婴幼儿配方乳粉中IgG活性含量的ELISA法以及ELISA试剂盒,并将自制的ELISA试剂盒与HPLC法进行比较。研究得出的结论为检测婴幼儿配方乳粉中IgG的低活性含量提供了参数,最终建立了测定婴幼儿配方乳粉中IgG活性含量的方法——双抗体夹心法。主要结果如下:(1)标准牛IgG的活性含量检测方法为:以5μg/mL的兔抗牛IgG浓度37℃3h加4℃保存12h(过夜)包被酶标板;采用含0.01g/mL的BSA(牛血清白蛋白)封闭液37℃封闭0.5h;待测样品或标准牛IgG的最佳反应时间为1.5h;采用1:250倍比稀释的HRP-兔抗牛IgG作为酶标二抗反应1h;底物溶液为:50μL TMB使用液+30μLH2O2+10mL底物缓冲液,反应20min。所获得的标准曲线方程为:y = 225.45x2 - 21.237x - 1.4713,相关系数达到0.999以上,标准曲线的相关性好。(2)通过选择离心时间和溶剂,实验确立乳粉样品的预处理条件:将乳粉样品溶于PBS溶液中调节pH值到4.5至4.6之间,4000r/min离心15min后,过滤取清液,再次调节pH值至7.4,定容于100mL容量瓶中。此预处理方法简单且分离效果好。(3)本研究建立的双抗体夹心法回收率为93.06%~100.12%,变异系数最大为3.090%,最小为1.200%;板内和板间的检测结果变异系数均小于5%,通过SPSS软件做出的质量控制图可得知,本方法的稳定性好,测得的数据准确度高。(4)试剂盒的组装在4℃条件下保存,可保存60d;根据SPSS软件做出的质量控制图可得知,本试剂盒的稳定性好,测得的数据准确可靠。本研究建立的自制试剂盒在很大程度上节省试验时间(酶标板包被不需保存12h即过夜,可直接测量),简化实验步骤。HPLC法与之相比较,得到的数据偏高,准确度低。