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背景:氧化/抗氧化失衡在肺纤维化发病机制中发挥着重要的作用。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)是谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成反应的限速酶,认为是非常重要的抗氧化酶;体外细胞学培养研究认为红系衍生核因子相关因子-2(NF-E2related factor2,Nrf2)可以调控抗氧化酶的表达。本实验室前期动物实验研究表明苦参碱具有抗炎、抗纤维化作用,但其调控Nrf2表达的具体机制不明。目的:本研究探讨苦参碱通过调控Nrf2对人胚肺成纤维细胞γ-GCS表达的影响,为寻找有效的抗肺纤维化药物提供临床治疗的实验基础。方法:体外培养的人胚肺成纤维细胞MRC-5至指数生长期,分为空白对照组、苦参碱组、苦参碱+SiRNA干预组。空白对照组为A组:细胞使用MEM/NEAA培养基加10%FBS(Hyclone)培养;苦参碱组:正常培养的人胚肺成纤维细胞加入苦参碱;苦参碱+SiRNA干预组:正常培养的人胚肺成纤维细胞加入苦参碱并加入SiRNA沉默Nrf2mRNA。根据苦参碱浓度进行亚分组:苦参碱组中0.25mmol/LMat为B组、0.5mmol/LMat为C组、1.0mmol/LMat为D组;苦参碱+SiRNA干预组中0.25mmol/L Mat为E组、0.5mmol/LMat为F组、1.0mmol/LMat为G组。以上各组细胞,经苦参碱处理1、2、4、8小时后,细胞Nrf2、γ-GCSmRNA表达水平使用RT-PCR检测,细胞Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平使用Western blot检测。结果:(1)人胚肺成纤维细胞中γ-GCSmRNA、Nrf2mRNA表达:A组低于B、C、D组(P<0.05);表达随Mat浓度增大呈上升趋势,以4h较高,第8h较低,但仍高于空白组(P<0.05)。(2)人胚肺成纤维细胞中γ-GCS蛋白、Nrf2蛋白表达:A组低于B、C、D组(P<0.05);表达随Mat浓度增大呈上升趋势,以4h较高,第8h较低,但仍高于A组(P<0.05);人胚肺成纤维细胞中γ-GCS蛋白质及mRNA表达,E、F、G组分别低于B、C、D组(P<0.05);且均低于A组(P<0.05)。(3)人胚肺成纤维细胞中γ-GCS的表达与Nrf2mRNA、蛋白表达呈正相关。结论:苦参碱可通过调控Nrf2的表达上调人胚肺成纤维细胞内源性抗氧化酶γ-GCS的表达。