罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)属于害虫生防真菌,在农林害虫防治中起着非常重要的作用。因其作为真菌杀虫剂具备安全、环保、易生产、货架期长等优点,多年来被广泛研究。然而却因杀虫效率低、致死时间长、防效不稳定等问题限制了它的大规模应用。因此,系统深入了解罗伯茨绿僵菌的致病和抗逆机制,并对其进行基因遗传改良成为了当下迫切需要的途径。WD40重复蛋白CreC基因是碳分解代谢抑制途径(CCR)中一个非常重要的调节因子,研究发现碳分解代谢抑制与昆虫病原真菌的生长和致病性有密切的关系。本实验以罗伯茨绿僵菌作为研究对象,通过基因敲除技术获得CreC敲除株,进一步分析CreC基因对罗伯茨绿僵菌的生长发育和致病性的影响。研究结果表明:与野生型(Mr23)相比,敲除株(△MrCreC)在SDAY、1/4SDAY和PDA上菌落直径明显减小,在几种碳源培养基上的生长速度减慢;产孢量相比野生型下降了 65%,同时RT-PCR结果显示与产孢量相关的基因大部分转录水平显著降低;敲除株在含刚果红、双氧水、氯化钠和氯化钾培养基上抑制生长更明显,相比野生型相对抑制率分别增加了 14%,8%,7%,8%;在紫外照射后敲除株(△MrCreC)孢子萌发中时提前了 6h,通过RT-PCR分析显示,敲除株在12h与紫外相关基因的表达量显著提高;热激处理后与野生型没有明显差异;体表侵染和体内注射后,敲除株侵染的大蜡螟死亡速度都明显减慢,与野生型(Mr23)相比,半致死时间分别延缓了 41h和29h;进一步研究得出敲除株(△MrCreC)的附着胞形成率相比野生型下降了 63%,同时RT-PCR数据显示体表侵染毒力相关基因转录水平显著下降,因此CreC基因影响了罗伯茨绿僵菌的体表侵染能力。综上所述,罗伯茨绿僵菌CreC基因的敲除影响了其正常的生长、产孢量、抗逆性、杀虫毒力,该基因对附着胞形成和体表侵染毒力相关基因表达的影响是杀虫毒力下降的原因之一。