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牛乳蛋白过敏症是婴幼儿最为常见的一种食物过敏,它不仅影响婴幼儿的生长发育,发生严重过敏反应时还可导致死亡。研究表明,牛乳α-乳白蛋白及β-乳球蛋白是引起婴幼儿过敏的主要过敏原蛋白,并且微量即可引发严重的过敏反应。因此,建立乳制品及其相关食品中牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的检测体系对预防牛乳蛋白过敏症具有重大现实意义。本研究采用饱和硫酸铵盐析法并结合DEAE-52阴离子交换色谱分离纯化牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白,采用SDS-PAGE检测表明,所分离纯化的牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白纯度均达理想的抗原纯度标准。以牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备了兔抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清,用酶联免疫吸附法检测抗血清效价,均达1:12800。运用免疫印记法检测抗血清的特异性,结果表明所制备的兔抗牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白抗血清的特异性较好,可用于酶联免疫吸附法检测。在优化ELISA条件后,建立了牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白检测的间接竞争ELISA方法。牛乳β-乳球蛋白检测的间接竞争ELISA方法:牛乳β-乳球蛋白理想的包被抗原浓度为1μg/L,抗血清的工作浓度为1:1600,酶标二抗的工作浓度为1:800。回归方程为y=-28.64x+122.5,R~2=0.991、最适检测范围为10-1000ng/mL。孔间误差6.25%,板间误差平均为8.15%,检出限为5ng/mL。各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,可用于乳制品及其相关食品中牛乳β-乳球蛋白的检测。牛乳α-乳白蛋白检测的间接竞争ELISA方法:牛乳α-乳白蛋白理想的包被抗原浓度为5μg/L,抗血清的工作浓度为1:1600,酶标二抗的工作浓度为1:800。并且得到回归方程为y=-43.24x+166.88,相关系数R~2=0.9844,最佳检测范围为50-1000ng/mL。孔间误差5.05%,板间误差:平均为8.92%,检出限为20ng/mL,以上各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,可用于乳制品及其相关食品中牛乳α-乳白蛋白的检测。