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新生儿筛查（newborn screening,NBS）是公共卫生领域的一项重要预防措施,先天性代谢异常（inborn errors of metabolism,IEM）作为新生儿筛查项目中的重要组成部分,是一类对新生儿的健康造成显著危害的疾病,早期的诊断、及时且正确的治疗能够在很大程度上降低患者致残率或避免死亡。但此类疾病大多不具有典型的患病特征,给疾病的确诊带来了较大的困难,而相关基因突变的检测是IEM疾病确诊的重要方法。本研究针对先天性有机酸代谢异常中的甲基丙二酸血症（methylmalonic acidemia,MMA）、氨基酸代谢异常中的希特林蛋白缺陷症（citrin deficiency,CD）以及脂肪酸代谢异常中的原发性肉碱缺乏症（primary carnitine deficiency,PCD）相关基因突变的检测方法进行探究,建立基于实时荧光PCR的快速基因突变检测方法。第一章首先系统地介绍了 IEM的临床表现、分类、常用的检测方法;其次介绍了新生儿筛查的主要目的、筛查标准、国内外新生儿筛查的现状以及面临的问题;最后介绍了本研究的主要内容和意义。第二章以MMA的两种致病基因——MMACHC和MUT——高频突变为检测对象,将多色探针熔解曲线分析（multi-color melting curve analysis,MMCA）技术应用于MMACHC和MUT的检测,建立了 2管MMACHC检测体系和3管MUT检测体系。灵敏度用人类基因组DNA考察均能达到50pg/reaction。我们针对两个检测体系分析考察了376份不同类型的随机标本,其中MMACHC体系检测到2份阳性标本和9份杂合携带者标本,包括7种突变:c.609G>A（4/376）、c.658660delAAG（3/376）、c.315C>G、c.394C>T（1/376）、c.567dupT（1/376）、c.569T>G（1/376）和c.641G>A（1/376）,其中c.569T>G和c.641G>A为未见文献报道的新突变。MUT检测体系共检测到4种突变:c.1677-1G>A（5/376）,c.1280G>A（3/376）,c.2080C>T（1/376）和 c.729-730insTT（1/376）,其中有 1份为c.1677-1G>A和c.1280G>A双杂合突变的阳性标本,突变检测结果与Sanger测序结果一致。第三章描述了 CD相关基因SLC25A13常见突变检测体系的建立过程,我们用人类基因组DNA为模板,对体系的重复性、灵敏度进行考察,结果表明SLC25A13检测体系灵敏度可达50 pg/reaction。对851份不同类型的临床样本进行检测,共检测到3种突变:c.851854delGTAT（7/851）、c.16381660dup（2/851）和IVS16ins3kb（2/851）;其中包括2份851854delGTAT和IVS16ins3kb双杂合阳性标本,与文献报道的频率基本一致,突变检测结果与Sanger测序结果一致。第四章,我们对PCD致病基因SLC22A5进行检测,根据中国常见的SLC22A5突变建立两管四色多重检测体系,体系灵敏度同样能够达到50pg/reaction。我们检测了795份随机临床标本,检测到1份c.1400C>G纯合突变标本、2份c.760C>T和c.1400C>G双杂合突变标本、10份c.1400C>G杂合标本、1份c.428C>T杂合标本以及1份尚未见文献报道的新突变c.752A>G杂合标本,总计4种突变,检测结果与Sanger测序结果一致。