毛樱桃多糖的分离纯化、结构分析及其抗氧化活性研究

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毛樱桃(Prunus tomentosa Thunb)属蔷薇科樱桃属野生或半野生植物,资源分布较广,其富含多种维生素、花青素、矿物质元素、多糖及氨基酸等营养活性成分。同时还具有一定的药用价值,如抗氧化、抗炎、抗冻伤等作用。目前对于毛樱桃营养成分分析的报道较多,其深加工,如毛樱桃果汁,毛樱桃酒等有所开发,对其所含的活性成分和药理作用等研究较少,关于毛樱桃多糖的研究还未见报道。为充分开发和利用这一植物资源,本文以毛樱桃为原料,对其多糖的提取工艺、分离纯化、结构及体外抗氧化活性进行了研究,主要的研究成果如下:(1)试验采用水提法提取毛樱桃粗多糖,根据单因素实验所得的实验结果,进行响应曲面设计试验,确定了毛樱桃粗多糖的最佳提取工艺条件:液料比,30:1(mL/g);提取次数,2次;浸提时间,2.3h;浸提温度,83℃。在此条件下,实际测得毛樱桃粗多糖提取率为7.52%。(2)毛樱桃粗多糖经DEAE-52纤维素柱分离后得到PTTP-A、PTTP-B、 PTTP-C三种组分,三组分再经SephadexG-100凝胶柱层析进一步分离纯化,分别得到PTTP-a、PTTP-b、PTTP-c三种组分。(3)高效液相色谱法对PTTP-a、PTTP-b、PTTP-c分析结果表明三种组分都为均一性多糖,且其平均分子量分别为6.26×105Da、7.97×105Da、6.02×105Da。气相色谱分析可知PTTP-a、PTTP-b的单糖组成基本相同,均由阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖及葡萄糖组成,PTTP-c由半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖和葡萄糖组成。(4)红外光谱分析显示PTTP-a、PTTP-b、PTTP-c、在3400cm-1、2930cm-1、1617cm-1、1426cm-1、1385cm-1、1226cm-1、1076cm-1、862cm-1附近的吸收峰为多糖的特征吸收峰,同时三种多糖均存在β-糖苷键。(5)1HNMR谱PTTP-a、PTTP-b、PTTP-c的信号峰为典型的糖环质子信号,因为其都集中在3.18-5.13ppm范围内,可大致推断三种毛樱桃多糖都存在α-和p-两种吡喃环构型。且大部分质子化学位移都小于5.0ppm,说明主要以p-糖苷键连接为主,与红外光谱谱图分析结果一致。(6)体外抗氧化活性评价结果显示,毛樱桃粗多糖具有一定的总还原能力,对O2-·、DPPH·和·OH也有一定的清除作用。同时随着毛樱桃粗多糖浓度的增加其清除作用也相应的增强。
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