成体神经干细胞移植治疗大鼠脑出血实验研究

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目的:评估成体神经干细胞移植治疗大鼠脑出血疗效,观察移植的成体神经干细胞在大鼠脑内分化方向。方法:①取成年大鼠海马齿状回,通过机械分离及胰酶消化法制备单细胞悬液;密度梯度离心及培养基选择法获取成体神经干细胞悬液;体外培养、鉴定及标记。②自体血纹状体注入法制作大鼠脑出血模型20只,选取LONGA评分相同的模型鼠10只,随机分为实验组(注入神经干细胞)和对照组(注入等量生理盐水)各5只,术后24小时,将体外培养并标记的大鼠成体神经干细胞通过立体定向脑实质移植法移植入大鼠脑内血肿周围。③术后每周,连续7周,采用旋转实验及肢体放置实验对大鼠进行行为学测试,以观察大鼠神经功能恢复状况;7周后行免疫组化检测移植的成体神经干细胞在实验组大鼠脑内的分化方向。结果:①成体神经干细胞在体外悬浮培养时逐渐成球生长,当克隆球直径达到160±10um时,部分成体神经干细胞开始长出突起,克隆球中央细胞因缺乏营养开始死亡,传至第三代时,细胞仍能保持较高的增殖能力。②自体血注入大鼠脑内纹状体后,大鼠出现明显脑出血症状及体征。③成体神经干细胞移植入大鼠脑血模型脑内后,实验组大鼠神经功能修复与对照组相比,存在显著差异(P<0.05);7周后,实验组大鼠脑内部分细胞BRDU/GFAP,BRDU/NEUN免疫组化双标染色阳性结论:①成年大鼠海马齿状回颗粒下区存在可以分离提取的成体神经干细胞。②自体血纹状体注入法能获得较为稳定的脑出血模型。③成体神经干细胞移植入大鼠脑出血模型体内后能显著促进大鼠神经功能修复;7周后,移植的细胞能在大鼠体内分化为表达神经元及胶质细胞特异性标志物的细胞。图13幅,表2个,参考文献48篇
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