红霉素、四环素降解菌的筛选、鉴定及其降解性能研究

来源 :浙江大学动物科学学院 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:XIONGSHENG0
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本研究从长期堆放抗生素药渣的土壤中驯化分离到一株红霉素降解菌ED1和两株四环素降解菌TD2和TD3。三株菌都能以降解的抗生素为唯一碳源。用微生物法测得ED1对红霉素的降解率为53.6%,TD2和TD3对四环素的降解率分别为58.7%和67.4%。   红霉素降解菌ED1为球状,2.5~3×3~4μm,出芽生殖,菌落为粉红色、圆形、表面光滑、湿润、凸起、边缘整齐。通过形态特征、生理生化和18S rDNA序列同源性分析鉴定该菌为粘性红圆酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。其18S rDNA在GenBank中的登陆号为RU294522,根据18S rDNA同源性构建该菌株与其同源性较高的并在数据库中注册的已有合法种名的菌株之间的遗传发育树。采用单因素多水平试验对菌株ED1降解红霉素时的培养基成分和培养条件进行优化,得出红霉素降解菌ED1可以利用红霉素为唯一碳源生长,适宜碳源与氮源分别为蔗糖和NH4C1。该菌降解红霉素的最适温度为30℃,最适pH范围为5.0-5.5,最适接菌量6%,降解率与通气量成正相关。在优化前该菌对红霉素的降解率仅为53.6%,而在优化后的最适反应条件下培养48h,该菌株对红霉素的降解率可达100%,与优化前的降解率相比,提高了46.4%。   四环素降解菌TD2和TD3均为革兰氏阴性菌,细胞大小为1.5~1.8×0.4~0.5μm和1.5~1.8×0.5~0.8μm,杆状,氧化酶阳性。通过形态特征、生理生化和16S rDNA序列同源性分析鉴定TD2为缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta),TD3为人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)。根据16S rDNA同源性分别构建降解菌株与其同源性较高的并在数据库中注册的已有合法种名的菌株之间的遗传发育树。通过对降解菌TD2、TD3的培养基成分和培养条件优化,得出TD2的适宜碳氮源、适宜矿物质分别是无碳源、蛋白胨0.50%、硫酸铜0.015%;最适培养条件是温度30℃、25ml/200ml装液量、1%接种量。而TD3的适宜碳氮源、适宜矿物质分别是葡萄糖0.50%、牛肉膏1.50%、硫酸铜0.015%;最适培养条件是温度30℃、25ml/200ml装液量、1%接菌量,与TD3的最适培养条件一致。在最适的条件下培养5天时TD2和TD3对四环素的降解率分别达为91.2%和93.7%,比优化前提高了120.8%和63.2%。
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