【摘 要】
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目的:使用分子生物学的PCR-DGGE法分离肠道细菌16SRNA V3可变区的PCR产物,经DGGE图谱条带分析,结合传统的微生物分离、培养、鉴定方法,探讨枸杞多糖对肠道微生态失调模型小鼠的调
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目的:使用分子生物学的PCR-DGGE法分离肠道细菌16SRNA V3可变区的PCR产物,经DGGE图谱条带分析,结合传统的微生物分离、培养、鉴定方法,探讨枸杞多糖对肠道微生态失调模型小鼠的调节作用。方法:首先采用给小鼠灌胃盐酸林可霉素的方式,制作出小鼠肠道微生态失调模型。随后将模型小鼠分为丽珠肠乐组、自然恢复组和枸杞多糖组,分别给予相应药物治疗。灌胃七天后,处死所有小鼠,采集回盲部粪便标本。梯度稀释粪便标本,而后采用传统的活菌培养和提取总DNA以及PCR-DGGE方法检测小鼠肠道菌群DNA。最后将所有数据收集分析,观察枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠的治疗效果。结果:传统活菌培养结果显示:小鼠肠道双歧杆菌、乳酸杆菌升高,肠杆菌、肠球菌下降,枸杞多糖组和丽珠肠乐组与自然恢复组比较,差异非常有显著性(P<0.01)。枸杞多糖组与丽珠肠乐组相比,差异有显著性(P<0.05)。PCR-DGGE结果显示:粪便样本提取总DNA浓度测定值方面,枸杞多糖组和丽珠肠乐组高于自然恢复组(P<0.05),DGGE的多样性指数分析结果为,丽珠肠乐组和枸杞多糖组大于自然恢复组和正常对照组,差异有显著性(P<0.05);枸杞多糖组稍优于丽珠肠乐组,但统计学无明显差异。结论:给小鼠灌胃盐酸林可霉素可以成功制造小鼠肠道微生态失调模型。传统活菌培养和PCR-DGGE的结果均证明,枸杞多糖对肠道微生态失调小鼠具有显著的调整作用。PCR-DGGE技术因具有全面性、灵敏度高、节省时间、无需微生物培养等优点,较传统培养法具有显著的优势。PCR-DGGE技术是诊断微生态失调、评价微生态调节剂作用的有力工具。
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