去甲斑蝥素-N乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球的制备及其抗肿瘤作用的实验研究

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目的:制备去甲斑蝥素-N-乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球(Norcantharidin-N-chitosan-silk fibroin-microspheres, NCTD-N-CS/SF-MS),观察其表征及其对兔VX2肝移植瘤的化疗栓塞术后抑瘤作用。方法:(1)采用乳化-固化法,制备去甲斑蝥素-N-乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球(NCTD-N-CS/SF-MS),光学显微镜观察及测量微球的粒径大小及分布,扫描电镜观察微球的表面形态,采用红外光谱法(FT-IR)验证微球的构成,并对微球的载药量、包封率、悬浮性及导管推注实验进行考察。采用体外动态透析法在pH7.4磷酸盐缓冲液释放介质中测定其溶胀性及释药性能。(2)40只新西兰大白兔经超声引导下于肝脏左叶植入VX2肿瘤组织块,建立肝移植瘤模型,超声监测肿瘤生长,并用影像学手段及病理表现评估建模是否成功。(3)取建模成功的动物30只并随机分为5组,每组6只,股动脉穿刺插管后经肝动脉分别给予NCTD-N-CS/SF-MS(A组);空白微球N-CS/SF-MS(B组);N-CS/SF-MS+NCTD溶液(C组);碘化油+NCTD溶液(D组);生理盐水(E组)。经治疗后,观察各组兔血常规及肝、肾功能和肝肿瘤体积的动态变化以及病理表现,术后30天CT及肝动脉造影评价治疗效果,并记录动物生存时间,计算生命延长率。结果:(1)所制去甲斑蝥素-N乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球在光镜及扫描电镜下均显示外观圆整,表面光滑,平均粒径117±4.3μm,载药量平均值为(15.08±2.85)%、包封率为(27.46±1.25)%,能够在PH7.4的磷酸缓冲液中快速溶胀,70min基本溶胀完全,体外释药缓慢平稳,7天的累积释放率为60%。(2)利用超声引导穿刺针种植操作方便,模型稳定,建模成功率87.5%。(3)各组动物血细胞数量及血红蛋白值均有不同程度下降,A、B、C组动物术后平均白细胞数量(中性粒细胞为主)增多,各治疗组动物肝功能均出现一过性损害;A组较余各组作用更强,抑瘤率高达85.01%,具有统计学意义(P<0.05),肿瘤体积远小于其他各组,病理切片示肿瘤大片凝固性坏死,肿瘤坏死率达56.78%,高于B组的49.63%及C组52.23%。术后30天CT示A组肿瘤体积明显小于其他各组,肿瘤内部坏死明显,肝动脉造影示栓塞彻底,仅少量侧支血管形成。A组平均生存时间最长,达到36.25天,生命延长率达54.25%。结论:NCTD-N-CS/SF-MS制备工艺简单易行,能明显抑制肿瘤生长,并造成肿瘤明显坏死(P<0.05)。
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