论文部分内容阅读
背景白血病是血液系统常见的恶性肿瘤，发病机制目前仍然不是很明确。随着联合化疗，靶向治疗以及造血干细胞移植等的临床应用，白血病的预后已经大为改观。但化疗的毒副作用，药品价格高，以及耐药机制的出现使得治疗仍然具有一定局限性。因此，寻找一种低毒高效的抗白血病药物是白血病研究的重要内容之一。重楼是一种应用广泛的中草药，其根茎为药用部分，生长在中国南方，具有消炎抗菌，止血，镇静止痛等作用。我们新近在寻找治疗慢性粒细胞白血病新药时发现从重楼中提取出来的小分子单体（重楼皂甙Ⅰ）在不影响正常骨髓及外周血单核细胞增殖的情况下能明显抑制K562细胞的增殖，并且对耐格列卫的K562-G01细胞系及其它多种白血病细胞系都有抑制作用，这说明对K562细胞的作用机制应该与抑制bcr／abl癌性融合蛋白无关，但是具体的作用机制仍不明确。本研究应用MTT试验、流式细胞术、RT-PCR等技术和方法深入研究重楼皂甙Ⅰ抗人白血病的可能机制，现将初步研究结果报道如下。材料与方法培养不同的白血病细胞株，用重楼皂甙Ⅰ按指定时间和剂量干预细胞。应用MTT法检测细胞活力，求出重楼皂甙Ⅰ对各细胞株及正常骨髓细胞和外周血细胞的48h IC50浓度；应用Annexin V-FLUOS／PI试剂盒和流式细胞术定量分析早期调亡细胞百分比；用cytoperm／cytofix和Caspase-3-McAb-PE定量检测含活化半胱天冬酶-3（Caspase-3）细胞百分比；用RT-PCR检测部分基因P53及GADD45α的表达趋势。结果（1）重楼皂甙Ⅰ作用白血病细胞株K562-G01、K562、THP1、U937、Raji、H9、KG-1 48h，其50％细胞生存受抑时的半数抑制浓度(IC50)分别为1.86μM、1.34μM、1.18μM、1.72μM、1.88μM、0.89μM和1.38μM，而对正常骨髓和外周血的IC50分别为71.12μM和29.2μM。（2）K562-G01细胞经重楼皂甙Ⅰ处理后，G0／G1期、S期和G2／M期细胞比例均显著下降，并且具有时间依赖性。而亚二倍体峰（凋亡细胞峰）细胞随着作用时间延长而增加。（3）5μM的重楼皂甙Ⅰ作用K562／G01细胞24h后，89.1％的细胞表达活化的Caspase 3凋亡分子，84.32％的细胞发生凋亡。（4）RT-PCR结果显示重楼皂甙Ⅰ能明显提高白血病细胞P53及GADD45α基因的表达。结论（1）重楼皂甙Ⅰ能通过诱导凋亡来抑制多种白血病细胞株的增殖，同时对正常骨髓及外周血单核细胞的增殖无明显影响。（2）通过诱导P53及其下游基因的表达和诱导Caspase-3活化介导白血病细胞发生凋亡可能是其作用机制之一。该研究提示重楼皂甙Ⅰ可能是一种新的治疗白血病药物，值得进一步研究。