稠李属三种果实花色苷抗氧化活性研究

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山桃稠李(Padus maackii)、稠李(Padus racemosa)、紫叶稠李(Padus virginiana)为蔷薇科稠李属的三种植物,在我国南北部地区均有分布生长,是多年生的落叶乔木。我国学者在稠李属植物的种植技术等方面研究颇多,而对其果实的花色苷研究利用的报道却很少。本试验采用稠李属的三种果实花色苷为研究对象,进行抗氧化能力对比,并且与Vc相比较;研究了三种果实的花色苷对人HepG2细胞的增殖抑制作用,以及对HepG2细胞的抗氧化系统影响;并探讨花色苷对HepG2细胞Nrf2/Keapl信号通路的作用。试验结论如下:(1)对稠李属植物果实花色苷体外抗氧化能力进行测定,稠李属植物果实化色苷对OH、O2-·、H2O2、ABTS、DPPH均有较强的清除能力以及还原能力,且随花色苷浓度增高抗氧化能力均增强,并呈剂量关系,但不及Vc对照组的清除能力。(2)胎盘蓝染色法测细胞的生长变化工线,MTT法检测细胞的生长抑制率,结果发现花色苷作用HepG2细胞后,各处理组细胞增殖受到抑制,活细胞数量随花色苷质量浓度的增大及作用时间的增加而呈下降的趋势,具有浓度及时间的依赖性关系。在倒置显微镜下,观察花色苷作用细胞后的形态,发现随着三种果实花色苷质量浓度的增大,细胞的特征形态逐渐消失并簇集成团。说明三种果实花色苷具有抑制肝癌细胞的生长的作用。(3)采用试剂盒法测定了三种果实花色苷作用于HepG2细胞48h后,细胞内抗氧化酶/物(T-SOD、GSH-ST、GSH-PX、CAT、GSH)、氧化酶(XOD)及T-NOS、iNOS、 cNOS活性和MDA含量的变化情况。通过检测发现,三种果实花色苷对HepG2细胞内抗氧化酶以及GSH含量影响的大小关系为稠李<山桃稠李<紫叶稠李,三种果实花色苷对HepG2细胞氧化酶活性以及MDA含量影响的大小关系为稠李>山桃稠李>紫叶稠李。这与MTT法测定的肿瘤细胞抑制率结果一致,证实了由于抗氧化酶活力减弱,氧化酶的活力升高以及丙二醛含量的增加导致细胞的损伤。(4)采用荧光探针DCFH-DA法检测三种果实花色苷作用HepG2细胞12、24、48h后,ROS的水平变化情况。结果表明,随花色苷质量浓度的增大以及作用时间的延长,ROS的生成在逐渐增加,处理组细胞内活性氧水平与对照组比较,均明显升高,其差异具有统计学意义(p<0.05)。说明由于花色苷作用HepG2细胞后ROS含量升高,迫使细胞处于氧化应激状态内,抗氧化酶的活性下降,氧化酶活性上升,MDA生成增多以及GSH减少,引发抗氧化系统失调,以致细胞凋亡。(5)采用酶联免疫法检测P13K激酶的活性变化。结果显示,随着三种果实花色苷质量浓度的升高P13K激酶的活性在逐渐降低,且与对照组比差异均极显著p<0.01)。采用实时荧光定量RT-PCR法检测GSTP1、Nrf2、Keap1的基因表达,结果显示,三种果实花色苷作用于HepG2细胞48h后,GSTP1、Nrf2、Keapl的基因表达均随花色苷质量浓度的增大而下调,且与对照组比差异均极显著(p<0.01)。以上所述表明,稠李属果实花色苷的抗氧化能力较强,可作为新型的天然功能性食用色素。
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