抗菌活性海洋放线菌的筛选及其活性天然物的分离与结构解析

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:huanhuan879600
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目的:从海洋放线菌库筛选具有抗菌活性的海洋放线菌菌株,分离纯化抗菌活性化合物,并对活性化合物进行结构解析,发掘抗菌活性化合物新资源。方法:1、抗菌活性海洋放线菌的筛选:根据分类信息,从海洋放线菌库中挑选分类明确的海洋放线菌菌株,充分复苏、活化,用2216E液体培养基摇瓶培养7天,收集培养液;以枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌为检测菌,用滤纸片法筛选出发酵液具有抗菌活性的海洋放线菌株。2、海洋放线菌抗菌活性株的培养条件优化:采用不同培养基配方和培养时间对抗菌活性株进行培养,确定优化菌株发酵液抗菌活性的培养条件。3、分离抗菌活性化合物:根据优化的培养条件,将该活性放线菌菌株进行小规模培养(150 L),离心,收集发酵液,40℃水浴旋转蒸发仪浓缩,有机溶剂萃取,通过抗菌活性示踪法,结合色谱方法分离纯化抗菌活性化合物。4、抗菌活性化合物结构解析:通过核磁共振(NMR)和高分辨质谱等方法进行结构解析。5、抗菌活性化合物抗菌谱的检测:采用滤纸片法对抗菌活性化合物组分进行抗菌活性分析。结果:1、筛选获得1株海洋放线菌,编号649-20,分类上归属于唐德链霉菌(Streptomyces tendae)。该菌株对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有显著抗菌活性,但对大肠杆菌和白假丝酵母菌无明显抗菌活性。2、该菌株在2216E液体培养基28℃、180 rpm摇瓶培养96 h,其培养液抑菌活性最强。3、经系列色谱分离纯化获得两个抗菌活性化合物Cd-A和Cd-B。4、两个抗菌活性化合物的结构解析分别为2-Hydroxy-3-propyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione和3-Propyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione,均为已发现的结构。从天然物生物代谢来源推测均为环二肽类衍生物。5、抗菌活性分析结果表明两个化合物Cd-A和Cd-B对革兰阳性菌具有显著的抗菌活性,化合物Cd-B还对部分革兰阴性水产病原菌具有显著的抗菌活性。结论:筛选获得一株有显著抗菌活性的海洋放线菌,分离纯化获得两个环二肽类衍生物,有别于传统的抗生素类化合物,具有开发为新型抗菌制剂的潜力。
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