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实验目的 涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一,约占全部涎腺肿瘤的9.95%,占涎腺恶性肿瘤的24%,平均为第二位的涎腺恶性肿瘤。腺样囊性癌是一种侵袭性很强的肿瘤,远处转移发生率较高,早期就出现肺转移,严重地危害患者的生命健康。酪氨酸蛋白激酶（tyrosine protein kinase,TPK）是近年来的研究热点,大多数生长因子受体具有酪氨酸激酶活性,当其与生长因子配体结合则发生自磷酸化,使TPK激活并将生长因子刺激信号向胞内传递。TPK不仅参与激素和生长因子等胞外信息的传递,还与细胞的恶变和增殖有关。 目前有关涎腺腺样囊性癌发生发展的机理仍不甚清楚,临床上缺少有效的治疗药物。本实验采用免疫组化及Western Blot技术,研究两种受体型酪氨酸蛋白激酶EGFR及ErbB-2在涎腺腺样囊性癌组织及两个细胞系中的表达,探讨EGFR及ErbB-2与腺样囊性癌发生发展的关系。本实验首次应用TPK抑制剂genistein处理SACC-83细胞,研究它的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响,并且检测凋亡相关基因及周期蛋白的表达变化,从而探讨TPK与涎腺腺样囊性癌的关系,为深入研究涎腺腺样囊性癌的发病机理及临床更有效的治疗该肿瘤提供新的思路。 实验材料与方法 1.细胞培养 SACC-83及SACC-LM细胞系用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基在37℃,5%CO2饱和湿度的孵箱中培养。 2.MTT检测法 96孔板中以每孔0.5×104个细胞的密度接种200μl单细胞悬液,培养24小时后,吸出培养液,每孔加入200μl含终浓度药物（0-220μmol/lgenistein）的培养液,继续培养,1-6天后（第3天换液）加入MTT（5mg/ml）试剂20μl/孔,37℃,继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养液,每