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背景与目的Graves病(Graves disease,GD)和桥本氏甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)是临床上最常见的自身免疫性甲状腺疾病(autoimmune thyroid diseases,AITD),但其发病机理尚未完全阐明。近年来的研究表明,细胞凋亡受体的激活及调节细胞凋亡的因子参与AITD的发病过程。Livin、热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)和聚集素(Clusterin)蛋白是体内重要的抗凋亡因子。Livin蛋白主要通过抑制Caspase途径、激活转化因子β激酶1(TAK1)依赖的c-jun N端激酶1(JNK1)信号转导途径发挥抗凋亡作用。HSP90α既可通过阻止procaspase-9与凋亡蛋白酶活化因子1凋亡体的结合而抑制凋亡的发生,又可通过构象的特异性与突变型p53结合,导致突变型p53复合体积聚,使细胞半衰期延长。HSP90α蛋白亦可通过阻止细胞分裂来发挥重要的抗凋亡作用。另外HSP90α还具有重要的免疫作用,在抗原的加工与呈递过程的研究中发现,热休克蛋白促进了这一分子的装配过程。而且,热休克蛋白自身可作为不同类病原体的主要抗原以及健康个体免疫系统的靶蛋白。Clusterin蛋白是一种具有细胞保护功能的蛋白质,具有抗凋亡作用。Clusterin也可与补体C5b-6结合,阻止其对补体C7、C8、C9的激活,抑制攻膜复合体C5b6789的形成,从而阻止补体介导的细胞溶解。关于Livin和HSP90α在GD和HT患者甲状腺组织中的表达,目前国内外均未见报道。Clusterin蛋白在GD和HT患者甲状腺组织中的表达,目前国内未见报道,国外仅有一篇。为此本研究采用S-P免疫组织化学方法,对Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD和HT中的表达进行研究并分析其之间的相关性,以探讨Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT发生发展中的作用。材料和方法1.采用SP免疫组织化学技术检测26例GD、15例HT患者手术切除的甲状腺组织和11例正常甲状腺组织(取自良性腺瘤旁甲状腺组织)标本中Livin、HSP90α、Clusterin蛋白的表达。2.结果判定:由两个不了解临床资料的病理医师分别观测切片判定染色结果,取其平均值。以GD、HT及正常甲状腺组织细胞质、细胞膜和(或)细胞核被染成棕黄色颗粒状物作为Livin、HSP90α和Clusterin蛋白阳性染色。在随机选取的10个高倍视野(×400)下半定量划分染色等级:(-):显色强度与背景无明显差别;(+):阳性细胞数＜10%,显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色;(++):阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间;(+++):阳性细胞数＞60%,多数细胞呈黄至棕黄色染色。3.统计学处理所有数据均经SPSS 12.0软件进行统计学检验。两样本或多样本阳性表达率的比较应用χ~2检验,小样本资料应用Fisher精确概率法。相关性检验采用Spearman等级相关分析,以α=0.05作为显著性检验水准。结果1.Livin、HSP90α蛋白定位于甲状腺滤泡上皮细胞的胞质和胞核,Clusterin蛋白主要定位于甲状腺滤泡上皮细胞的胞质和胞膜,呈异质性表达,阳性着色为棕黄色颗粒。Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在间质纤维母细胞、血管内皮细胞和浸润的淋巴细胞等均未见表达。Livin蛋白在正常甲状腺组织和GD主要表达在胞核。Livin蛋白在HT主要表达在胞质,在淋巴细胞浸润区附近的滤泡上皮细胞表达较强,Livin蛋白在结构完整、上皮细胞数目多、胞浆丰富的甲状腺滤泡表达较强,而在结构破坏、上皮细胞胞浆少、萎缩的甲状腺滤泡表达相对较弱。HSP90α蛋白在正常甲状腺组织、GD和HT中均以胞质表达为主。HSP90α蛋白在GD和HT中淋巴细胞浸润区的表达与远离淋巴细胞浸润区的表达均无明显差别。Clusterin蛋白在正常甲状腺组织无表达;在GD主要表达在甲状腺滤泡上皮细胞胞质和胞膜;在HT中,Clusterin蛋白主要表达在滤泡上皮细胞的胞质和胞膜,滤泡腔侧细胞膜较基底膜侧细胞膜着色强,另外在间质中浸润的淋巴细胞形成的淋巴滤泡的生发中心,可见一些有枝蔓状突起的细胞阳性表达Clusterin蛋白,根据其形态,推测为滤泡树突状细胞。2.Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT中的表达均明显高于正常甲状腺组织(P均＜0.05),Livin、HSP90α蛋白在GD和HT中的表达均无明显差别(P均＞0.05)。Clusterin蛋白在HT中的表达明显高于GD(P＜0.05)。3.在HT中,Livin蛋白的表达与HSP90α蛋白的表达呈显著正相关(r=0.899,P＜0.05),与Clusterin蛋白的表达无明显相关性(r=0.202,P＞0.05),HSP90α蛋白的表达与Clusterin蛋白的表达亦无显著相关性(r=0.374,P＞0.05)。在GD中,Livin蛋白的表达与HSP90α、Clusterin蛋白的表达均无显著相关性(r分别为0.211和0.126,P均＞0.05),HSP90α与Clusterin蛋白的表达呈显著正相关(r=0.617,P＜0.05)。结论1.本研究证实在GD和HT中,Livin、HSP90α和Clusterin蛋白的表达均明显高于正常甲状腺组织,这三种蛋白主要由甲状腺滤泡上皮细胞分泌产生。2.Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD中异常高表达可能主要通过抑制部分甲状腺细胞凋亡,间接促进甲状腺组织的增生;Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在HT中甲状腺滤泡上皮的高表达可能是机体在病理情况下的一种代偿现象,能阻止部分甲状腺细胞凋亡,对机体产生保护作用。Clusterin蛋白在HT中淋巴滤泡的生发中心的滤泡树突状细胞上表达,能阻止滤泡树突状细胞凋亡,可能是造成HT患者甲状腺破坏及萎缩的原因之一。