金线莲多糖的分离纯化、结构鉴定及抗糖尿病活性研究

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金线莲(Anoectochilus)是一种珍稀草本植物,其多糖具有抗氧化、降血脂、抗肿瘤等多种生物活性,被广泛应用于治疗各种慢性疾病,素有“药王”美称。糖尿病是一组由胰岛素缺乏/抵抗而引起的以持续性高血糖为基本特征的慢性疾病。目前糖尿病的化学疗法包括注射胰岛素和口服降血糖药物,然而几乎所有的商业药物都有毒性和副作用。因此,如何更有针对性地开发安全高效的天然抗糖尿病药物成为了市场和科研关注的热点。本课题首先对福建金线莲和台湾金线莲的全草、根和叶部位多糖(ARPs、ARPs-1、ARPs-2 和 AFPs、AFPs-1、AFPs-2)进行提取和初级结构表征,通过动物实验评估这六种多糖的体内抗糖尿病活性,在优选出活性最高的粗多糖后,进一步进行该多糖的分离纯化、结构鉴定和抗糖尿病活性评估,深入揭示多糖结构与活性之间的构效关系。主要研究结果如下:1、六种金线莲粗多糖主要由阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成且不含糖醛酸,其中ARPs-1和AFPs-1的单糖组成相似,均富含葡萄糖(分别为97.53%和94.56%),此外还有少量木糖。福建金线莲多糖的平均Mw范围为148.6 KDa~619.9 KDa,显著高于台湾金线莲多糖(22.2KDa~66.0KDa),且不同部位多糖的平均Mw存在显著差异。此外,无论是福建金线莲还是台湾金线莲,它们的根和叶多糖构型都存在明显差异,而全草多糖和根多糖的结构基本相似,并且同时存在α和β两种构型。2、动物试验结果表明ARPs(300mg/kg/d)的抗糖尿病活性显著高于其他多糖,其次是AFPs。此外,两种金线莲根多糖均具有比叶多糖更高的抗糖尿病活性,而全草多糖的抗糖尿病活性优于根多糖和叶多糖。3、ARPs经分离纯化后所得多糖组分ARPs-p的HPGPC图谱呈现出单一对称峰,Mw为97.2 KDa,其主要单糖是葡萄糖,所占比例为97.75%,此外还含有少量半乳糖(1.20%)、鼠李糖(0.5%)、阿拉伯糖(0.26%)、木糖(0.23%)和甘露糖(0.06%),同时存在微量的半乳糖醛酸(0.24%)。进一步分析表明,ARPs-p主要是一个以→3)-β-D-Glcp-(1→连接形式为主链,糖链分支点存在于→1,3)-β-D-Glcp-(6→残基单元的一级结构。4、灌胃ARPs-p后,由STZ诱导的糖尿病小鼠血糖水平显著降低,体重、肝糖原、胰岛素和抗氧化酶水平显著升高,肝脏脂质水平也得到显著改善,其中高剂量(200 mg/kg/d)ARPs-p治疗修复作用最为突出,中剂量(100 mg/kg/d)次之,但是不存在剂量依赖性。表明ARPs-p具有优异的降血糖,抗氧化和降血脂活性,并通过调节小鼠体内抗氧化活性,以保护糖尿病小鼠胰岛细胞免受自由基损害,改善高血糖、氧化应激和血脂异常。
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