【摘 要】
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目的1.建立小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型,探讨TSG-6对小鼠感染泡状棘球蚴后肝组织纤维化标志物的表达情况,以及对TGF-β1-Smad2/3通路的影响。2.建立体外小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2与泡状棘球蚴原头节共培养体系,模拟小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型,探讨TSG-6对共培养后小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2纤维化标志物的表达情况,以及对TGF-β1-Smad2/3通路的影响。方法1.体内实验:采用肝
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目的1.建立小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型,探讨TSG-6对小鼠感染泡状棘球蚴后肝组织纤维化标志物的表达情况,以及对TGF-β1-Smad2/3通路的影响。2.建立体外小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2与泡状棘球蚴原头节共培养体系,模拟小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型,探讨TSG-6对共培养后小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2纤维化标志物的表达情况,以及对TGF-β1-Smad2/3通路的影响。方法1.体内实验:采用肝被膜下穿刺法建立小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型20只,20天后将小鼠随机分为模型组、TSG-6治疗组（每组10只）;另设对照组10只。TSG-6治疗组每三天经腹腔注射重组鼠TSG-6蛋白（rm TSG-6）0.5μg/25μL PBS,对照组和模型组每三天经腹腔注射等量PBS。治疗30天后安乐处死各组小鼠,取各组小鼠血清、模型组和TSG-6治疗组取泡状棘球蚴周围肝组织,对照组取正常肝组织。ELISA检测各组小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的含量;HE染色观察各组肝组织病理学变化;天狼猩红染色及Masson染色观察各组肝组织胶原蛋白沉积程度;免疫组化检测各组肝组织中α-SMA、Collagen I、Collagen III的表达;Western-blotting检测各组肝组织中α-SMA、Collagen I、Collagen III以及TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达水平。2.体外实验:取对数生长期小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2和泡状棘球蚴原头节分为肝细胞组、共培养组（肝细胞+原头节）、TSG-6干预组（肝细胞+原头节+20ng/m L TSG-6）,分别于24h、48h取各组上清液和肝细胞。ELISA检测各组培养上清中ALT和AST含量;Western-blotting、qRT-PCR检测体外培养各组肝细胞中α-SMA、Collagen I、Collagen III以及TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达和mRNA表达。结果1.小鼠肝泡状棘球蚴疾病模型建立成功。与模型组相比,TSG-6治疗组小鼠肝脏表面泡状棘球蚴病灶生长受限,肝组织淋巴细胞浸润减少;TSG-6治疗组小鼠血清血清肝损伤指标（ALT、AST）的含量减少（P＜0.05）。天狼猩红及Masson染色显示TSG-6治疗组泡状棘球蚴周围肝组织胶原纤维沉积明显较模型组减少（P＜0.01）。免疫组化染色结果表明经TSG-6治疗后泡状棘球蚴周围肝组织纤维化标志物α-SMA、Collagen I、Collagen III表达低于模型组（P＜0.05）。Western-blotting检测显示经TSG-6治疗后泡状棘球蚴周围肝组织纤维化标志物:α-SMA、Collagen I、Collagen III以及TGF-β1-Smad2/3通路相关因子:TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达水平低于模型组（P＜0.05）。2.体外小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2与泡状棘球蚴原头节共培养后,24h、48h肝细胞培养上清ALT、AST含量明显增加（P＜0.01）;24h、48h肝细胞纤维化标志物:α-SMA、Collagen I、Collagen III以及TGF-β1-Smad2/3通路相关因子:TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白相对表达量和mRNA相对转录水平均较肝细胞组明显增加（P＜0.01）。TSG-6干预后48h肝细胞培养上清ALT、AST含量减少（P＜0.05）;48h肝细胞α-SMA、Collagen I、Collagen III以及TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白相对表达量和mRNA相对转录水平均低于共培养组（P＜0.05）。结论1.通过对小鼠肝泡状棘球蚴感染模型注射TSG-6进行治疗,显示TSG-6能减轻感染小鼠肝损伤指标（ALT、AST）,减少肝脏组织炎症反应、胶原组织沉积以及纤维化标志物的蛋白表达。2.通过对体外共培养模型（肝细胞+原头节）给予TSG-6干预,显示TSG-6减少共培养后肝细胞损伤以及纤维化标志物的表达。3.TSG-6能改善泡状棘球蚴感染所致的肝纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1-Smad2/3信号通路有关。
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