本实验室保存的357菌株对多种病原真菌具有较好的拮抗活性,它强烈抑制水稻纹枯病菌的生长。本实验研究了357菌株的最适宜生长条件以及产生拮抗物质的最佳条件。在不同培养基(KMB、LB、PDA、Davis、SMA、淡薄培养基)上生长时,357菌株在KMB培养基上产生的菌量最多,而且等量拮抗液中以从KMB培养基上提取的拮抗物质抑菌效果最好。以等菌量浸泡液拮抗活性的测定研究中,发现在Davis培养基上产生的拮抗物质活性最大,KMB培养基次之。通过对KMB培养基与LB培养基进行比较,从而对LB培养基成份做一定的改变,将LB培养基中分别加入甘油和磷酸二氢钾、硫酸镁,研究其对357菌株产生的拮抗物质活性的影响得知,加入甘油之后,357菌株的拮抗活性大大的增加,而加入磷酸二氢钾、硫酸镁则其拮抗活性几乎没有任何的变化。Davis培养基是一种完全培养基,以Davis培养基为基础,研究葡萄糖、蔗糖、甘油和乳糖等不同碳源和硫酸氨、硝酸钠和氨水等不同氮源对357菌株产生的拮抗物质活性的影响。研究结果发现,在葡萄糖或蔗糖加入甘油之后,357菌株产生的菌量会相对增加,而且其拮抗活性也有一定程度的增大,以葡萄糖加甘油的菌量最多,抑菌效果最好,而乳糖产菌量最少,且其拮抗活性也最小。在不同氮源的影响中,357菌株对硫酸氨的利用率最大,产生的菌量多且拮抗活性也比较大。本实验通过对357菌株产生拮抗物质的生物学研究,为今后大量提取357菌株拮抗物质提供依据。 本实验利用PCR技术对357菌株的16S rDNA作序列分析,序列结果在Genebank中进行Blast同源序列检索,结果显示357菌株与已报道过的B. subtilis 16S rDNA序列有高度的同源性,因此可知357菌株是属于B. subtilis。 357菌株产生的拮抗物质是一种小分子物质,由过去的实验得知该菌产生的拮抗物质可能是与甾类物质相似的一类物质,综合分析各种资料表明在细菌上产生的拮抗物质可能是何帕烷类化合物。本研究通过提取357菌株的基因组DNA,利用PCR技术对何帕烷类化合物生物合成的关键酶(Squalene-hopene cyclase简称SHC)基因进行扩增,通过连接转化等实验克隆出SHC基因部分序列,将测出的序列在Genebank中进行Blast同源序列比较,其结果表明克隆出的基因序列与B. subtilis中的SHC基因有72%的同源性,从而初步认定本实验已获得SHC的部分序列,这为今后开展357菌株产生拮抗物质的分子合成机理和分子改造的研究打下基础。