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近年来,灰树花是研究的比较多的药食两用菌之一,其多糖具有明显的生物活性,尤其在降血糖、治疗糖尿病、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫等方面作用突出,如单纯从子实体中提取灰树花多糖,会受其生长周期长等不利因素的影响,因此,本研究拟进行液体发酵生产的方法,内容包括出发菌株的工艺优化、动力学模型的建立、紫外诱变快速高产稳定菌株的获得、新灰树花菌株新工艺的探索、产物多糖提取、理化性质的表征与结构的初步鉴定等,为灰树花多糖开发提供理论依据。 本研究的主要内容和结论如下所述。 (1)通过对灰树花Grifola sp.JSULIU-D1米糠麸皮培养基成分和发酵条件的七因素均匀试验探索,得到了关于菌丝干重,菌丝多糖,胞外多糖,pH值,菌丝湿重,残渣重,干物质重,原料失重以及米糠麸皮消耗量九个指标的10个经验动力学方程和2个理论动力学方程。 (2)获得灰树花菌株Grifola sp.JSULIU-D1菌丝、菌丝多糖、胞外多糖3个不同指标最优工艺分别为: ①菌丝体最优生产工艺,米糠浓度8.00g/100mL、麸皮浓度8.00 g/100mL、磷酸二氢钾浓度0g/100mL、七水硫酸镁浓度0g/100mL,转速180r/min,温度20℃,时间为8.5d。菌丝干重浓度为6.737g/100mL。 ②菌丝多糖最优生产工艺,米糠浓度0g/100mL、麸皮浓度8.00 g/100mL、磷酸二氢钾浓度0~0.15g/100mL、七水硫酸镁浓度0~0.15g/100mL,转速180r/min,温度32℃,时间为8.5d。菌丝多糖浓度为447.276mg/100mL。 ③胞外多糖最优生产工艺,米糠浓度8.00g/100mL、麸皮浓度8.00 g/100mL、磷酸二氢钾0~0.15g/100mL、七水硫酸镁0~0.15g/100mL,转速120~180r/min,温度20~32℃,时间为6.0d。胞外多糖浓度为828.376mg/100mL。 (3)测出了灰树花灰树花Grifola sp.JSULIU-D1紫外诱变的剂量曲线,较优诱变时间为60s,致死率为85.19%。经过十代诱变,5次传代筛选,4次高产发酵试验筛选,得到了较优变异菌株UVCAO-6,命名为灰树花新菌株Grifolasp.CCTCC M2015065。较出发菌株Grifola sp.JSULIU-D1,新灰树花菌株Grifolasp.CCTCCM2015065的菌丝体和菌丝多糖产量分别提高了28%和36%。拮抗现象表明新灰树花菌株Grifola sp.CCTCC M2015065遗传物质可能发生了变化。 (4)通过对新灰树花菌株Grifola sp.CCTCC M2015065米糠麸皮发酵培养基的均匀试验探索,得到了关于菌丝干重、菌丝多糖、胞外多糖,pH值,菌丝湿重,残渣重,干物质重,原料失重以及米糠麸皮消耗量九个指标的9个经验动力学方程,以及新灰树花菌株Grifola sp.CCTCC M2015065在限制条件米糠麸皮总量为9g/100mL时,菌丝、菌丝多糖2个指标生产的较优工艺分别为:①菌丝体较优生产工艺,米糠浓度为9.00g/100mL,麸皮浓度为0g/100mL,磷酸二氢钾浓度为0.27 g/100mL,七水硫酸镁为浓度0g/100mL,转速为150r/min,温度为28℃,发酵时间为4.5d,得到最大菌丝干重为4.76g/100mL;②菌丝多糖较优生产工艺,米糠为0g/100mL,麸皮为9g/100mL,磷酸二氢钾为0.27g/100mL,七水硫酸镁为0~0.27 g/100mL,转速为150r/min,温度为28℃,发酵时间为4.5d,得到最大菌丝多糖为376.114mg/100mL。相同条件下,较原始菌株菌丝量和菌丝多糖分别提高了30.4%和28.1%。 (5)观察了Grifola sp.CCTCC M2015065发酵过程中四个指标的变化,包括:菌丝干重,菌丝多糖,胞外多糖和总多糖。发现灰树花新菌株Grifolasp.CCTCC M2015065在发酵第八天达到6.211g/100mL,更优于出发菌株的试验最大值5.367g/100mL和预测最大值5.816g/100mL。 (6)提取分离新菌株Grifola sp.CCTCC M2015065多糖,纯化后,经理化反应检测,确定纯化后的样品是不含蛋白质和氨基酸的非淀粉多糖。经中红外光谱扫描,结果表明其具有一般多糖的特征吸收峰,初步确定多糖结构。