论文部分内容阅读
目的:1.建立OVA致敏和激发的哮喘小鼠模型;2.观察支气管哮喘急性期、慢性期及缓解期小鼠与正常小鼠血清IL-17和IgE的水平变化;3.观察支气管哮喘急性期、慢性期及缓解期小鼠与正常小鼠肺泡灌洗液中细胞分类及肺组织病理学的变化;4.探讨IL-17与IgE在支气管哮喘免疫学发病机制中的作用及相关性。方法:4～6周龄、18～22g健康清洁级雌性昆明小鼠40只,随机分为急性哮喘组A1组(10只)、慢性哮喘组A2组(10只)、哮喘缓解组A3组(10只)和对照组C组(10只),以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发的方法建立哮喘模型:A1组、A2组和A3组在实验第0、7、14天予20μgOVA+150μlAI(OH)3+50μl NS(100mg/L)混悬液腹腔注射致敏;第28、29、30天将A1组、A2组和A3组每只小鼠单独置于5L密闭容器中,以2%OVA雾化吸入激发,使小鼠暴露在OVA气雾中20～30min直至出现哮喘样发作为止;A1组在第30天雾化的24小时后处死;A2组在第31～69天每天予2%OVA雾化吸入;A3组30天后不予任何处理;C组予等量生理盐水腹腔注射及雾化吸入,处置时间与A2组相同;第70天处死A2组、A3组及C组。眼球取血约1.5ml后,颈椎脱位处死,血液离心,取上层血清,分别用酶联免疫法检测白介素-17(IL-17)及IgE;支气管肺泡灌洗液(BLAF)进行细胞分类计数;取肺组织病理切片HE染色观察炎性细胞浸润。所得实验数据均采用SPSS18.0软件进行分析。结果:1.哮喘小鼠模型成功建立的表现及比较:A1组、A2组及A3组小鼠均出现烦躁不安,呼吸急促,擦鼻,打喷嚏,口唇尾部紫绀,活动频繁,毛发竖起失去光泽,腹肌痉挛,大小便失禁等表现;A2组表现的尤其显著,更易惊,严重者呼吸节律不齐,俯伏不动,四肢瘫软;A3组早期较明显,后期症状稍缓解;C组未出现上述症状。2.血清IL-17水平:A1组小鼠为15.14±1.98ng/ml,A2组小鼠为20.63±1.90ng/ml,A3组小鼠为10.96±1.44ng/ml,C组小鼠为0.39±0.46ng/ml;A2组IL-17水平明显高于A1、A3及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A1组IL-17水平明显高于A3组及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A3组IL-17水平明显高于C组(P<0.01),差异有统计学意义。3.血清IgE水平:A1组小鼠为6.63±0.78ng/ml,A2组小鼠为6.94±0.12ng/ml,A3组小鼠6.22±0.15ng/ml,C组小鼠为5.44±0.24ng/ml。A2组IgE水平明显高于A1、A3及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A1组IgE水平明显高于A3组及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A3组IgE水平明显高于C组(P<0.01),差异有统计学意义。4.小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞所占百分比(EOS%、NE%):A2组细胞总数和EOS%、NE%明显高于A1组、A3组及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A1组细胞总数和EOS%、NE%明显高于A3组及C组(P<0.01),差异有统计学意义;A3组细胞总数和EOS%、NE%明显高于C组(P<0.01),差异有统计学意义。5.血清IL-17与IgE水平呈显著正相关(r=0.942,P<0.01),差异有统计学意义;血清IL-17与BALF中EOS%水平呈显著正相关(r=0.956,P<0.01),差异有统计学意义;血清IL-17与BALF中NE%水平呈显著正相关(r=0.938,P<0.01),差异有统计学意义。6.肺组织病理学观察:A1、A2、A3组小鼠与C组小鼠对比显示肺脏表面肿胀,体积增大,切面可见渗出白色泡沫。肺组织切片HE染色示支气管管腔狭窄,黏膜水肿,黏液腺增生,黏膜皱襞增多,肺泡隔增厚、水肿形状不规则,肺泡腔融合扩大。A1组支气管黏膜、黏膜下层、平滑肌及血管周围可见大量炎性细胞浸润;A3组炎性细胞浸润稍减少;A2组则在急性期的病理基础上出现气道上皮纤维化,出现气道重塑。C组小鼠气管及肺泡结构正常,支气管粘膜上皮完整,未见明显炎症细胞。结论:1.哮喘小鼠模型建立成功,急性期、慢性期及缓解期的病理变化符合哮喘的病理生理改变。2.IL-17在哮喘的免疫学发病机制中起促进作用,参与哮喘的急性炎症反应及气道重塑过程,并且IL-17的水平能在一定程度上表示哮喘病情的严重程度。3.哮喘小鼠存在免疫功能紊乱,IgE、EOS、NE在急性期升高,慢性期明显升高,缓解期稍减低但仍较正常水平高,说明IgE、EOS、NE均参与了哮喘的发生发展。4.支气管哮喘小鼠IL-17与IgE水平成正相关,两者相互促进,共同促进哮喘的发生及发展。