目的:1.研究前列腺平滑肌细胞体外培养方法,为前列腺平滑肌细胞体外研究提供实验模型;2.观察TFPI基因转染对体外培养的人增生前列腺平滑肌细胞增殖的影响;3.初步探讨TFPI基因影响体外培养的人增生前列腺平滑肌细胞增殖的机制。方法:取前列腺增生患者手术切除的前列腺组织,采用酶消化法分离前列腺平滑肌细胞;采用免疫组化方法进行细胞鉴定;后续实验使用第五代细胞,实验组将pIRES-TFPI基因转染入体外培养的前列腺平滑肌细胞,对照组用空白质粒pIRES进行细胞转染,采用细胞计数法和四氮唑蓝MTT法观察对细胞增殖的影响:采用RT-PCR检测细胞内TFPI基因的表达情况。结果:本实验采用增生前列腺分离的前列腺细胞呈典型的“峰与谷”样生长,通过SMA免疫组化染色和MASSON染色鉴定,证实为分离的细胞绝大多数为平滑肌细胞。TFPI基因转染后,前列腺平滑肌细胞内的TFPImRNA水平明显提高,是未转染组的7倍,对照质粒组的3.5倍,转染后四天开始可以观察到前列腺平滑肌细胞的增殖受到明显抑制。结论:1.酶消化法能获得足够数目的具有良好增殖能力前列腺平滑肌细胞,分离纯度符合实验要求,为进行前列腺平滑肌细胞体外研究提供了良好的实验基础;2.TFPI基因转染对体外培养的前列腺平滑肌细胞的增殖有明显抑制作用,提示TFPI基因对前列腺平滑肌细胞的增殖具有调控作用,有必要对其作用机理进行进一步研究。