论文部分内容阅读
目的:探究白藜芦醇(Resveratrol，Res)与NOX抑制剂二苯基氯化碘盐(Diphenyleneiodonium chloride，DPI)联合应用对造血系统辐射损伤的保护作用 方法:体外实验:Ficoll分离法获取C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞(BMMNCs)，带药孵育30分钟后接受4Gy剂量的照射（137Cs源射线）。①照射后带药孵育18小时，生物发光法检测BMMNCs细胞活力。②调整BMMNCs浓度，对照组以4x104个细胞/2mL甲基纤维素培养基(M3534)，照射组和给药组以2x105个细胞/2mL3534培养基的比例进行充分混合后，0.5mL/孔接种至24孔板，并于37℃，5％CO2培养箱内培养。培养的第五天检测BMMNCs的粒细集落形成数目(CFU-GM)。③竞争性移植实验检测Res与DPI联用对辐射损伤造血干细胞移植重建功能的影响。体内实验:将50只C57BL/6小鼠随机分为对照组（Control）、4Gy照射组(IR)、照射并给予Res组(Res)、照射并给予DPI组(DPI)、照射并Res与DPI联用组(Res+DPI)。对照射组和给药组小鼠以1 Gy/min的剂量率进行4Gy剂量的全身照射(Totalbodyirradiation，TBI)。从照射当天开始给药一周，Control和IR组给同等体积的溶剂对照;Res组剂量为20mg/kg·day（灌胃）;DPI组剂量为1mg/kg·day（皮下）;Res+DPI组剂量为Res20mg/kg·day，DPI1mg/kg·day。于照射后第22日取材检测脾脏指数、克隆形成能力(CFU-GM)及利用流式细胞仪对不同分化程度的骨髓造血细胞进行分析。 结果:体外实验:①生物发光法检测细胞活力数据显示，4Gy照射组与对照组相比，BMMNCs细胞活力下降70％(P＜0.05); Res组、DPI组、Res+DPI组与照射组相比，细胞活力分别升高12.2％、11.6％、20.4％(p＜0.05); Res和DPI联用组与单独用药组相比，细胞活力升高且差异具有显著性(p＜0.05)。②CFU-GM实验结果表明，照射组与对照组相比，集落形成的数量下降92.5％(p＜0.05); Res组、DPI组、Res+DPI组与照射组相比，集落形成数量分别升高50.8％、52.3％、90.4％(p＜0.05);联合用药组与单独用药组相比，集落形成数量明显增多(p＜0.05)。③竞争性移植实验结果显示，照射组与对照组相比，供体细胞在外周血细胞中所占比例下降73.6％(p＜0.05)，供体细胞中淋巴细胞比例也下降18％(p＜0.05); Res组、DPI组、Res+DPI组与照射组相比，供体细胞在外周血细胞中所占比例分别升高4.7％、4.5％、16.9％(p＜0.05)，供体细胞中淋巴细胞的比例也分别上升26.7％、33.8％、50.2％(p＜0.05);联合用药组与单独用药组相比，供体细胞占外周血细胞比例以及供体细胞中淋巴细胞比例均有明显升高(p＜0.05)。体内实验:①照射组与对照组相比，小鼠脾脏指数下降了31.8％(p＜0.05);所有用药组与照射组相比，小鼠脾脏指数均有显著升高(p＜0.05)，但联合用药组与单独用药组相比并无显著性差异。②照射组与对照组相比，CFU-GM集落形成数量下降79.5％(p＜0.05);所有用药组与照射组相比，集落形成数量均明显增多(p＜0.05)，但联合用药组与单独用药组相比并无显著性差异。③分析各组小鼠不同程度骨髓造血细胞显示，照射组与对照组相比小鼠造血干细胞(HSC)、造血祖细胞(HPC)、长期造血干细胞(LT-HSC)、短期造血干细胞(ST-HSC)数量分别下降65.2％、62.7％、63.1％、66.6％(p＜0.05);所有用药组与照射组相比，HSC、HPC、LT-HSC、ST-HSC数量均显著性增多(p＜0.05)，但联合用药组与单独用药组相比并无显著性差异。 结论:体外细胞水平实验发现Res与DPI对辐射造成的骨髓造血干/祖细胞损伤具有一定的协同保护作用;动物体内实验在目前用药方案情况下，未发现这两种药物具有协同作用。