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莲子草假隔链格孢菌产生的毒素(Vulculic acid)可引致空心莲子草叶片水渍状病斑、根部变褐及植株萎蔫,有应用于防治该草的潜能。本论文对该毒素进行分离纯化,并对其致病机理及作用范围进行了研究,取得了如下结果:
莲子草假隔链格孢菌培养滤液经DM-130大孔树脂吸附、甲醇洗脱、乙酸乙酯浸提,可以获得粗毒素。粗毒素经苯:丙酮=1:1重结晶、硅胶柱层析后获得毒素纯品(白色针状晶体)。经红外光谱分析比较,所获得的毒素为莲子草假隔链格孢毒素(Vulculic acid)。
以空心莲子草叶片和根尖为材料,研究了Vulculic acid对空心莲子草细胞膜透性及细胞内过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明,Vulculic acid能够引致空心莲子草细胞膜透性和酶活性的改变,且对叶片和根尖组织的影响基本一致。随毒素浓度的增加和处理时间的延长,细胞膜透性呈上升趋势。经毒素处理后,细胞内CAT、APX、PPO、POD活性在处理初期均低于对照,而SOD和PAL,活性高于对照。
以空心莲子草叶片和根尖为材料,研究了Vulculic acid对空心莲子草细胞超微结构的影响。结果表明,Vulculic acid可引起空心莲子草细胞超微结构的变化,且随毒素浓度的增加和处理时间的延长,破坏作用更加明显。叶片细胞经毒素处理后,质壁分离,质膜消解;叶绿体片层紊乱,膜消解;线粒体膜破裂,内嵴消解;细胞核核膜消解,细胞核变形,核仁断裂。根尖细胞经毒素处理后也出现了类似结果。
采用种子萌发法及胚根胚芽生长测定法,分别测定了Vulculic acid在10μg/mL、25μg/mL和50μg/mL浓度下对4科(菊科、禾本科、茄科、十字花科)7种植物(金腰箭、鬼针草、水稻、小麦、茄子、番茄、白菜)种子萌发及胚根、胚芽伸长的影响。结果表明,不同科植物对Vulculic acid的敏感性不同,菊科植物对其比较敏感,禾本科和茄科植物次之,十字花科植物则表现出较强的抗性。该毒素对金腰箭和鬼针草种子的萌发和胚根、胚芽伸长均有明显抑制作用;而对白菜种子均无明显影响。毒素对水稻和小麦种子的胚芽伸长无明显影响:低浓度(10μg/mL、25μg/mL)毒素对其种子萌发无明显影响,却明显促进了胚根的伸长;而高浓度(50μg/mL)对其种子萌发和胚根伸长均有明显抑制作用。低浓度(10μg/mL、25μg/mL)毒素明显促进了茄子和番茄的胚根、胚芽伸长,而高浓度(50μg/mL)则产生了明显抑制作用。本研究结果揭示了Vulculic acid与寄主发病的密切关系,为该毒素的开发应用提供了理论依据,亦为毒素构效关系的研究奠定了基础。