朝鲜蓟叶提取物对酒精诱导HepG2细胞的影响

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目的:高相液相色谱法分析检测朝鲜蓟叶主要活性成分含量,并研究朝鲜蓟叶提取物对酒精诱导的HepG2细胞损伤的影响。方法:建立同时测定朝鲜蓟叶中绿原酸(3-O-caffeoylquinic acid)和洋蓟素(1,5-di-O-caffeoylquinicacid)的高效液相色谱方法。以色谱条件:ECOSIL C18(4.6mm×200mm,5um)色谱柱,0.2%磷酸水溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1mL/min,波长330nm,柱温29℃,对绿原酸和洋蓟素进行定量分析。以肝癌细胞株HpeG2为实验材料,采用酒精加入细胞培养液培养HepG2细胞,建立酒精损伤HepG2细胞模型,以MTT法筛选酒精处理浓度、时间以及朝鲜蓟叶水提物最佳作用浓度,通过检测细胞培养基中ALT、AST、 MDA和细胞内TG、 GSH、 SOD的水平,并对细胞进行RNA抽提,检测PPARy和TNF-a mRNA的表达,来评价朝鲜蓟叶水提物对酒精诱导的HepG2细胞损伤的防护作用,并对其有关机制进行初步探讨。结果:绿原酸和洋蓟素的色谱峰面积与进样浓度呈现良好的线性关系,平均加标回收率分别为100.20%、RSD为1.31%;99.02%、RSD为1.65%。该分析方法快速、准确、重现性好,可用于朝鲜蓟资源开发产品的质量分析。分别以0.6%、1.2%、2.4%酒精浓度联合2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml朝鲜蓟叶水提物处理培养HepG2细胞48h,随着酒精处理浓度增高,细胞的AST、 ALT、TG、 MDA水平明显升高,GSH、 SOD活性显著下降,PPARy mRNA表达量下降,[NF-αmRNA表达量上升。但随着朝鲜蓟叶水提物浓度增加,与模型组比较,细胞中AST、 ALT、 TG, MDA水平明显下降,GSH、 SOD活性逐渐升高,其PPARγ mRNA表达量有所上调,TNF-α mRNA表达量有所下调。结论:朝鲜蓟叶水提物对酒精诱导的HepG2细胞损伤具有一定的保护作用,能够降低细胞的脂质过氧化损伤程度,清除机体内的氧自由基,提高抗氧化酶活力,降低酒精性肝损伤产生的相关基因的表达。本实验为朝鲜蓟叶的研究开发提供了一定的实验数据,并为其应用于缓解酒精性肝损伤提供了相关的理论依据。
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